對蝦白斑綜合癥病毒VP22-26和VP28基因的克隆和表達(dá).pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文對蝦白斑綜合癥病毒VP2226和VP28基因的克隆和表達(dá)姓名：謝燕婷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：李國平謝明星20080401福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要對蝦白斑綜合癥病毒(WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV)是由對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)引起的以感染對蝦甲殼內(nèi)側(cè)出現(xiàn)直徑為05～2rffn大小的白色斑點為主要特征的暴發(fā)性傳染病。該病感染率和死亡率都極高，給養(yǎng)蝦業(yè)造成了巨大的經(jīng)

2、濟(jì)損失。WSSV具有廣泛的宿主范圍，在甲殼綱和昆蟲綱動物中均有其敏感的宿主，以蝦、蟹等十足目類為多。病毒粒子是橢圓形的桿狀病毒，其大小為80120X250380nm。WSSV是一種具有囊膜無包涵體的雙鏈DNA病毒，約為300Kbp，是造成自1993年以來我國大面積暴發(fā)對蝦病毒性疾病的主要病原。該病傳播速度快，感染蝦群在3～7d內(nèi)死亡率高達(dá)90～100％，對我國及世界的對蝦養(yǎng)殖造成了嚴(yán)重的危害，而目前尚未有有效的防治方法。囊膜蛋白是病毒感

3、染與致病力的重要決定因子，WSSV的囊膜蛋白與細(xì)胞受體的關(guān)系及其作用機(jī)理目前尚不清楚。WSSV有個主要的囊膜蛋白VP28，VP28蛋白己被證明在病毒的吸附、侵入過程中起著重要的作用。目前VP22／26是囊膜還是核衣殼蛋白還存在爭議。病毒的入侵需要病毒與細(xì)胞表面受體的特異性結(jié)合，而囊膜蛋白的特異性抗體與病毒粒子的結(jié)合阻遏了病毒與細(xì)胞受體的結(jié)合，進(jìn)而影響了病毒的吸附、侵入或脫衣殼過程。現(xiàn)已有研究證明利用大腸桿菌表達(dá)的WSSV的囊膜蛋白VP2

4、8免疫兔子制備的抗血清在對蝦體內(nèi)具有一定中和病毒的能力。本實驗參考GenBank上發(fā)表的WSSV囊膜蛋白基因VP22／26和VP28的序列，應(yīng)用Premier50軟件在起完整的閱讀框架外設(shè)計并合成兩對引物，應(yīng)用PCR擴(kuò)增得至UVP22／26和VP28兩基因，大小均為615bp。分別將VP22／26，VP28用和BanffI和HinDIH進(jìn)行酶切，再按正確的閱讀框插入表達(dá)載體pET28a()中，構(gòu)建出重組表達(dá)載體pET—VP22／26和p