對蝦白斑綜合癥口服卵黃抗體的研制.pdf

1、白斑綜合癥(whitespotsyndrome，WSS)是當(dāng)前全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)所面臨的危害性最大影響范圍最廣的病害之一，并成為目前制約養(yǎng)蝦業(yè)發(fā)展的主要瓶頸之一。正因如此，世界各國的水產(chǎn)病害專家均對WSSV投入了極大關(guān)注。根據(jù)實(shí)際需要，本研究致力于開發(fā)抗WSSV的口服蛋黃抗體制劑，以尋找一種防治WSS簡單有效的新方法。 首先，本實(shí)驗(yàn)用改進(jìn)的簡單有效的WSSV差速離心法對病蝦蝦鰓組織進(jìn)行病毒提純，并與目前廣泛采用的超速離心法作了比較后

2、，得出差速離心完全可以替代超速離心的結(jié)論；然后用提純的病毒以不同劑量加福氏佐劑對蛋雞免疫后，間接ELISA方法觀察抗體的生成規(guī)律，確認(rèn)合適的WSSV免疫程序?yàn)槭酌?00ug，以后每隔兩周加強(qiáng)免疫一次，并且劑量加大一倍，經(jīng)過三次免疫，可以在卵黃中檢測到高效價(jià)的抗體，且持續(xù)時(shí)間超過兩個(gè)月。接下來我們對卵黃抗體的分離純化及適合大規(guī)模制備的工藝進(jìn)行了研究，經(jīng)水稀釋及鹽析兩個(gè)簡單的步驟得到了純度為80﹪左右的抗體溶液，在進(jìn)一步的SephadexG

3、-25及DEAE纖維素柱層析純化后，得到了純度高達(dá)97.3﹪的卵黃抗體；然后通過不同方式的卵黃抗體噴霧干燥實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了直接噴霧抗體損失不大，且在添加了保護(hù)劑后還能進(jìn)一步的保持抗體活性，認(rèn)定噴霧干燥是簡單易行的大規(guī)模卵黃抗體制備方法。最后我們用噴霧制備的卵黃粉添加到對蝦基礎(chǔ)日糧中，深入研究了不同劑量口服卵黃抗體對WSSV人工攻毒條件下對螯蝦的保護(hù)效果，結(jié)論是20﹪的卵黃添加量能夠在一定程度上延緩螯蝦的死亡時(shí)間，而40﹪的卵黃添加量則能夠使