兩種黃瓜A-半乳糖苷酶基因全長(zhǎng)cDNA克隆與序列分析.pdf

1、α-半乳糖苷酶(α-galactosidase，EC3.2.1.22)是廣泛存在于高等植物、動(dòng)物和微生物中的一類重要水解酶。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)其他物種中α-半乳糖苷酶序列的保守區(qū)段，已經(jīng)克隆了4種黃瓜α-半乳糖苷酶的全長(zhǎng)cDNA序列。通過已公布的黃瓜基因組序列，根據(jù)同源性分析，發(fā)現(xiàn)黃瓜基因組中還存在另兩種α-半乳糖苷酶基因。
　　 本論文利用反轉(zhuǎn)錄PCR(reversetranscription-PCR，RT-PCR)和cDNA末端快

2、速擴(kuò)增(RapidamplificationofcDNAends，RACE)技術(shù)克隆了這兩種酶的cDNA全長(zhǎng)，分別命名為:黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ和黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ，GenBank登錄號(hào)分別為JN680267和JQ327828，序列結(jié)果表明:黃瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ基因編碼430個(gè)氨基酸，編碼的蛋白質(zhì)理論分子量為47.9KD。黃瓜堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ基因編碼783個(gè)氨基酸，編碼的蛋白質(zhì)理論分子量為86.1KD。對(duì)根據(jù)cDNA序列

3、推斷出的蛋白質(zhì)序列分析結(jié)果表明，酸性α-半乳糖苷酶Ⅲ蛋白C端存在一段信號(hào)肽，將定位于液胞中，而堿性α-半乳糖苷酶Ⅲ則分布于細(xì)胞質(zhì)中。
　　 收集目前GenBank中已發(fā)布的高等植物的α-半乳糖苷酶序列，聚類分析結(jié)果表明，酸性α-半乳糖苷酶可分為3組，黃瓜的3種酸性α-半乳糖苷酶分屬其中的1組;堿性α-半乳糖苷酶分為3組，其中每組均包含黃瓜的1種堿性α-半乳糖苷酶。結(jié)合相關(guān)報(bào)道，對(duì)這6組酶的生物學(xué)功能進(jìn)行了總結(jié)分析，結(jié)果表明:酸性