褐飛虱精氨酸激酶基因的克隆及其RNAi載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、褐飛虱(Nilaparvata lugens(stal))屬同翅目，飛虱科，是水稻上的主要害蟲。RNAi在昆蟲上成功的應(yīng)用于鑒定多種基因的功能。這項技術(shù)在害蟲防治領(lǐng)域也取得了一定進展。精氨酸激酶是調(diào)節(jié)無脊椎動物能量代謝的重要酶之一。磷酸精氨酸中的高能磷酸鍵在精氨酸激酶的作用下被轉(zhuǎn)移形成ATP。褐飛虱精氨酸激酶(Arginine Kinase，AK)編碼區(qū)共編碼357個氨基酸，全長1071bp，根據(jù)活性區(qū)域motif CPTNLGT選擇了

2、ak基因包括的333bp核苷酸片段構(gòu)建dsRNA片段。擴增帶T7啟動子的AK活性區(qū)正義鏈和反義鏈后利用in vitro Transcription T7 Kit體外合成dsRNA，利用包含該段dsRNA的人工飼料飼喂褐飛虱進行生物活性測定。初步結(jié)果表明：持續(xù)飼喂人工飼料2d后，褐飛虱在飼喂含有ak dsRNA的人工飼料后，開始死亡。8d后，死亡率達(dá)到了81.5%。由于雙鏈RNA表達(dá)抑制轉(zhuǎn)化載體pds1301能夠在植物中表達(dá)雙鏈RNA，因

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