黃柏生物堿及其復(fù)方對豬和小鼠熱應(yīng)激中IL-4-IFN-γ的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、近年來，很多證據(jù)表明Th1和Th2細(xì)胞在介導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答中具有重要作用。Th1/Th2通過分泌的細(xì)胞因子進(jìn)行自我和相互調(diào)節(jié)，維持二者的免疫平衡，這一特性與中醫(yī)理論的陰陽學(xué)說極為相似。Th1/Th2的平衡作為免疫平衡的核心，對免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定起著重要調(diào)節(jié)作用。Th1分泌的LFN-γ與Th2分泌的IL-4之間的平衡對Th1/Th2起關(guān)鍵調(diào)控作用。在實(shí)際研究中，一般以高表達(dá)的IFN-γ和IL-4分別代表Th1和Th2。 在獸醫(yī)臨床中發(fā)現(xiàn)

2、，由黃柏、蒼術(shù)、藿香、石膏以不同比例組成的中藥復(fù)方Ⅰ和中藥復(fù)方Ⅱ，可提高豬對高熱環(huán)境的適應(yīng)能力。為探討黃柏生物堿及其復(fù)方對熱應(yīng)激的調(diào)控機(jī)制，本文研究了高溫應(yīng)激條件下豬和小鼠免疫相關(guān)指標(biāo)lFN-γ、IL-4的變化規(guī)律以及黃柏生物堿及其復(fù)方的免疫調(diào)節(jié)作用。完成的實(shí)驗(yàn)有： 采用ELISA法，研究中藥復(fù)方對熱應(yīng)激后豬血清、脾臟中IFN-γ、IL-4水平的調(diào)控作用。熱應(yīng)激可使IFN-γ、IL-4水平顯著上升，中藥復(fù)方Ⅰ和中藥復(fù)方Ⅱ均可顯著

3、調(diào)節(jié)熱應(yīng)激時(shí)IFN-γlL-4水平的升高，使其恢復(fù)到正常，且中藥復(fù)方Ⅱ的效果更好。進(jìn)一步研究中約復(fù)方Ⅱ顯示，中藥復(fù)方Ⅱ可有效調(diào)節(jié)熱應(yīng)激所致的小鼠脾臟中IFN-γIL-4的改變，使其恢復(fù)至正常。 為評(píng)價(jià)復(fù)方中黃柏活性部位的藥理作用，建立了小鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外增殖的熱應(yīng)激模型。熱應(yīng)激模型條件為：熱應(yīng)激溫度40℃、熱應(yīng)激時(shí)間1h、熱應(yīng)激后3h采樣測定。 對黃柏生物堿的提取和純化進(jìn)行了優(yōu)選。采用比色法篩選堿提、醇提、酸提、酸醇提

4、四種黃柏提取方法，醇提法的效果最好；采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化黃柏醇提法的提取工藝，提取工藝為：生藥10倍量的75％乙醇回流提取3次，每次1.5h；采用大孔樹脂吸附法和鹽析法篩選黃柏純化工藝，前者效果較好且以30％的乙醇作為洗脫劑，所得生物堿的含量最高。 采用MTT法，篩選黃柏生物堿的活性部位，高溫可顯著抑制小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖。堿提、醇提、酸醇提、酸提黃柏生物堿(100μg/ML)均可顯著促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖。用大孔吸附樹脂純化

5、醇提的黃柏生物堿進(jìn)行藥效學(xué)篩選，結(jié)果顯示100μg/mL的黃柏生物堿對小鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外增殖的促進(jìn)作用最強(qiáng)。為進(jìn)一步驗(yàn)證MTT法篩選出的黃柏生物堿活性部位對熱應(yīng)激的免疫調(diào)控作用，采用ELISA法測定了體外培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞IFN-γ、IL-4的含量，小鼠脾臟淋巴細(xì)胞在熱應(yīng)激條件下IFN-γ、IL-4水平偏離正常，純化黃柏生物堿可使其迅速恢復(fù)止常。 以上試驗(yàn)表明，黃柏生物堿及其中藥復(fù)方均可顯著調(diào)節(jié)熱應(yīng)激對機(jī)體免疫機(jī)能所致的改變