高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白B表位誘導(dǎo)中和抗體能力的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界范圍內(nèi)廣泛存在的一種危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病。引起該病的病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)。目前PRRSV的研究還不夠深入,對(duì)病毒的抗體依賴性增強(qiáng)作用(antibodydependent enhancement,ADE)、持續(xù)性感染及中和抗體等問題的研究結(jié)果還存有爭(zhēng)議。2006年,我國(guó)

2、出現(xiàn)了危害更為嚴(yán)重的高致病性PRRSV變異毒株(highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome,HP-PRRSV),給該病的防控帶來了更為嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。
　　 GP5蛋白上的B表位(37SHL／FQLIYNL45)一直被認(rèn)為是PRRSV經(jīng)典毒株的主要線性中和表位。在HP-PRRSV毒株中,B表位有一個(gè)氨基酸突變(L／F39I)。為了證實(shí)突變對(duì)B表位抗原性

3、的影響以及B表位在誘導(dǎo)抗HP-PRRSV中和抗體中發(fā)揮的作用,本研究合成了PRRSV經(jīng)典株CH-1a和HP-PRRSV HuN4的B表位短肽,分別免疫家兔制備了兩份特異性多肽抗血清。此外,將表達(dá)B表位肽的核酸序列連入pGEX-6P-1表達(dá)載體,構(gòu)建pGEX-B重組表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)后獲得了B表位肽與GST的融合蛋白(GST-B).經(jīng)SDS-PAGE和Western blot證實(shí),GST-B融合蛋白獲得了正確表達(dá)。間接免疫熒光(IFA)檢

4、測(cè)結(jié)果顯示,兩份多肽抗血清均能與PRRSV經(jīng)典株和HP-PRRSV毒株發(fā)生特異性反應(yīng),IFA抗體效價(jià)無差異。病毒中和試驗(yàn)結(jié)果表明,兩份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。為了證實(shí)B表位誘導(dǎo)中和抗體的能力,本研究將12頭PRRSV及其抗體均為陰性的健康仔豬,首先以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)進(jìn)行基礎(chǔ)免疫,然后用強(qiáng)毒株(HuN4-F5)進(jìn)行多次接種后制備了豬高免血清。通過間接ELISA和Westernblot測(cè)

5、定了豬高免血清中針對(duì)B表位肽的抗體水平,通過病毒中和試驗(yàn)測(cè)定了豬高免血清中的抗PRRSV中和抗體水平,并比較了兩者之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果表明,同一頭豬在不同時(shí)期的高免血清中針對(duì)B表位肽的抗體水平變化不大,而抗HP-PRRSV中和抗體水平則經(jīng)歷了先升高后降低的過程,兩者之間沒有正相關(guān)關(guān)系。此外,將B表位合成肽和GST-B融合蛋白分別與豬高免血清充分混合并孵育后進(jìn)行中和試驗(yàn),結(jié)果表明兩者都沒有抑制抗HP-PRRSV中和抗體的能力。以上結(jié)果表明