解淀粉芽孢桿菌PEBA20生物膜表型特征及其與抑菌活性的關(guān)系.pdf

1、植物病害生防細(xì)菌的研究是生物防治領(lǐng)域的研究熱點，但是生防菌的應(yīng)用卻受到防治效果不穩(wěn)定、抑菌活性易下降甚至喪失的限制，這在很大程度上與人工培養(yǎng)條件改變了其自然屬性有關(guān)。同時也有越來越多的證據(jù)表明，在自然生境下，大多數(shù)微生物是以生物膜（biofilm）形式而不是浮游形式存在，微生物生活史中的大部分是在生物膜的狀態(tài)下完成的。
　　 基于上述兩點，本實驗對一株楊樹內(nèi)生生防菌Bacillus amyloliquefaciens PEBA2

2、0 進(jìn)行了生物膜表型特征的測定，并研究了與生防細(xì)菌抗菌活性的相關(guān)性。
　　 首先對PEBA20的野生型菌株P(guān)EBA20-W0314的生物膜表型進(jìn)行了系統(tǒng)闡述。
　　 PEBA20-W0314 在NA 固體平板上培養(yǎng)5d 時，其生物膜表型為“鳥巢狀”，向四周擴展范圍較小，向上隆起明顯，為近圓形；PEBA20-W0314 在NB 液體培養(yǎng)基中靜置培養(yǎng)48h時，其生物膜表型為致密，堅固，完整，表面有波浪狀紋理。
　　

3、對實驗室規(guī)則人工繼代過程中生物膜表型與抑菌活性的變化進(jìn)行同步檢測的結(jié)果顯示：整個過程約以第9 代為分界，在第9 代之前其生物膜表型及抑菌活性的變化較緩慢，而在第9 代之后生物膜表型和抑菌活性均開始發(fā)生顯著變化。截止至第9 代，PEBA20 對玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、蘋果腐爛病菌（Valsa mali）、楊樹潰瘍病菌(Botryosphaeria dothidea)和禾谷絲核菌(Rizoctonia cereal

4、is)的抑菌率僅依次下降了9.1％、13.2％、5.4％和2.4％。而其生物膜表型的變化也是從第9 代開始發(fā)生顯著變化：
　　 前期單菌落類型呈多樣化，共先后出現(xiàn)8 類菌落類型，而后期單菌落類型逐漸減少，最后只保留2種具有截然不同特性的單菌落；同時在氣-液界面形成生物膜的厚度與堅固性也呈逐漸下降趨勢。表明野生型生防菌株W0314 在實驗室長期繼代保存時會發(fā)生生物膜表型與抑菌活性的同步變化，且兩者變化規(guī)律存在相關(guān)性。對于PEBA2

5、0 不同生物膜狀態(tài)下發(fā)酵液抑菌活性的檢測，同時進(jìn)行了皿內(nèi)實驗和楊樹愈傷組織上對楊樹潰瘍病菌的抑制實驗。
　　 比較了W0314和NM0705的生物膜表型和抑菌活性，結(jié)果顯示：與W0314 相比，NM0705的單菌落平坦，擴展面積較大，在氣-液界面成膜較稀薄，堅固性差，生物膜半定量法檢測顯示NM0705 成膜菌的數(shù)量約為W0314的1/2。同時NM705的抑菌活性相對W0314 其抑菌活性也顯著下降，對四種指示病原真菌的菌絲生長抑