松材線蟲體前端特異性cDNA文庫的構(gòu)建及初步分析.pdf

1、松材線蟲是松樹的毀滅性病原，但迄今其致病機(jī)理不甚清楚。松材線蟲蟲體前端包括食道腺、頭感器、表皮以及分泌系統(tǒng)等一些與致病相關(guān)的重要器官，構(gòu)建其特異性文庫將有助于分離鑒定松材線蟲的寄生致病相關(guān)基因，將為進(jìn)一步揭示致病機(jī)制提供重要依據(jù)。 本研究在Huang等人的固相消減雜交基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，提高了消減雜交過程中的穩(wěn)定性與可靠性，雜交后未能檢測(cè)到持家基因，雜交效果達(dá)到了預(yù)期設(shè)想。構(gòu)建的松材線蟲體前端cDNA文庫約含6000個(gè)陽性克隆，隨

2、機(jī)挑取其中400個(gè)陽性克隆進(jìn)行PCR檢測(cè)，凝膠電泳顯示其片段大小在200bp～1000bp之間，其中大于400bp的片段有79條，占片段總數(shù)的19.8％。將大于400bp的片段進(jìn)行測(cè)序，得到48條序列。以蟲體前端和后端cDNA作為探針進(jìn)行反向Northern雜交驗(yàn)證，結(jié)果顯示35條片斷是在松材線蟲身體前端表達(dá)的。經(jīng)過BLASTX分析發(fā)現(xiàn)，所得序列均未被報(bào)道過。其中編號(hào)為Bx0B38的序列與大豆胞囊線蟲類毒敏原蛋白有37％相似性，其cDN

3、A全長(zhǎng)為637bp，編碼產(chǎn)物為152個(gè)氨基酸，含有119bp5’非編碼區(qū)和59bp3’非編碼區(qū)，其中3’非編碼區(qū)含有多聚腺苷酸化信號(hào)(AATAAA)；對(duì)Bx0B14分析發(fā)現(xiàn)，其cDNA片段長(zhǎng)度為389bp，編碼產(chǎn)物與馬鈴薯金線蟲的EXPB2protein相似性為46％，E-value為1e-17。與馬鈴薯金線蟲的EXP1protein相似性為45％；對(duì)序列Bx0C65的分析發(fā)現(xiàn)，cDNA片段長(zhǎng)度為419bp，編碼產(chǎn)物為117個(gè)氨基酸，編