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1、目的:本文旨在探討奧氮平(olanzapine)的抗膠質(zhì)瘤作用及其可能的作用機(jī)制。
方法:體外實(shí)驗(yàn)選用膠質(zhì)瘤T98和LN229細(xì)胞。MTT法檢測(cè)不同濃度的奧氮平(0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mΜ),作用不同時(shí)間后對(duì)兩個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的增殖的影響。Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3、p62和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的變化,免疫熒光檢測(cè)自噬熒光顆粒的形成與分布情況。Hoechst33258染色以及 A
2、nnexin V-FITC/PI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度奧氮平處理后,兩個(gè)細(xì)胞凋亡的情況。MTT和集落形成實(shí)驗(yàn)分析自噬抑制劑3MA對(duì)奧氮平抑瘤作用的影響。LN229細(xì)胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,口服給以?shī)W氮平,繪制腫瘤體積生長(zhǎng)曲線(xiàn),觀察奧氮平抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。Western blot檢測(cè)腫瘤組織中自噬相關(guān)蛋白LC3、p62和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)的情況。免疫組化分析法分析各組移植瘤中增殖指數(shù)Ki-67和凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的表達(dá)
3、情況。
結(jié)果:MTT結(jié)果顯示,奧氮平對(duì)兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞LN229和T98均有抑制作用,且呈劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性。LC3、p62的蛋白表達(dá)情況以及免疫熒光檢測(cè)LC3的顆粒形成與分布情況都顯示奧氮平能夠在這兩株細(xì)胞中誘導(dǎo)自噬。Western blot分析Bcl-2蛋白表達(dá)、Hoechst33258染色實(shí)驗(yàn)以及V-FITC/PI染色實(shí)驗(yàn)表明,奧氮平能夠促進(jìn)LN229和T98細(xì)胞凋亡。MTT和集落形成實(shí)驗(yàn)表明,自噬抑制劑3MA減弱了奧
4、氮平對(duì)這兩株細(xì)胞的增殖抑制作用。裸鼠皮下移植瘤體積曲線(xiàn)說(shuō)明,奧氮平能夠在體內(nèi)抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)。Western blot分析移植瘤的Bcl-2蛋白表達(dá),顯示奧氮平能夠促進(jìn)移植瘤凋亡;LC3和p62蛋白表達(dá)顯示,高劑量奧氮平在體內(nèi)皮下移植瘤中誘導(dǎo)自噬。免疫組化分析移植瘤組織中Ki-67和caspase-3陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果顯示,奧氮平抑制裸鼠皮下移植瘤的增殖并且促進(jìn)其凋亡。
結(jié)論:奧氮平在體外、體內(nèi)都能夠抑制膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)。其抗膠質(zhì)瘤作用
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