轉(zhuǎn)牛生長激素基因雞的研究.pdf

1、生長激素，是由腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞分泌的一類單鏈多肽類激素，它是一種具有廣泛生理功能的生長調(diào)節(jié)素。能影響幾乎所有的組織和細(xì)胞，其主要作用是刺激骨、軟骨細(xì)胞的生長和分化，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、糖及脂肪的代謝。與動(dòng)物生長發(fā)育、繁殖等密切相關(guān)，目前成為在提高動(dòng)物生長速度、生長性能等方面研究的熱點(diǎn)之一。本研究將牛生長激素基因功能區(qū)的基因片段構(gòu)建到真核表達(dá)載體pEGFP-N1，對重組質(zhì)粒pEGFP-N1-BGH進(jìn)行脂質(zhì)體包埋，采用胚盤顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因雞

2、，為培育具有生長速度快、適應(yīng)能力強(qiáng)等特性以及產(chǎn)業(yè)化前景廣的轉(zhuǎn)基因雞打下基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　 本研究運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，提取犢牛腦垂體總RNA，利用設(shè)計(jì)的一對特異性引物，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)擴(kuò)增出BGH基因功能區(qū)片段，通過DNA重組技術(shù)將該基因片段定向克隆到pEGFP-N1真核表達(dá)載體CMV啟動(dòng)子下游，構(gòu)建pEGFP-N1-BGH表達(dá)載體。通過PCR擴(kuò)增、酶切和測序的方法對重組DNA進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示

3、：應(yīng)用RT-PCR克隆的BGH功能區(qū)片段，長度為654bp；成功構(gòu)建了pEGFP-N1-BGH真核表達(dá)載體。且BGH基因和EGFP基因讀碼框一致。
　　 雞蛋開窗法是雞胚盤顯微注射法的關(guān)鍵技術(shù)之一，為此本研究對未轉(zhuǎn)染外源基因的種蛋開口后進(jìn)行了4種不同的封口方法對孵化率的影響試驗(yàn)。 設(shè)置四個(gè)試驗(yàn)組：①蛋殼膜＋封口膠，②蛋殼膜＋蛋殼，③蛋殼膜＋石蠟，④蛋殼膜。同時(shí)把未經(jīng)任何處理的種蛋設(shè)置為對照組。結(jié)果表明：4個(gè)實(shí)驗(yàn)組的雞胚的孵化率分

4、別為10[％]，18[％]，8[％]，2[％]。而對照組孵化率為83.3[％]。蛋殼膜+蛋殼的封口方法處理的孵化率相對最高。
　　 采用胚盤纖維注射法進(jìn)行轉(zhuǎn)染試驗(yàn)，一次注射受精卵200枚，孵出小雞21只，孵化率為10.5[％]，對孵化后死亡的5～7胚齡的全胚和7胚齡后的雞胚的心、肝、脾、肺、腎、腦、皮膚以及活雞的血液、皮膚進(jìn)行檢測。熒光檢測結(jié)果顯示：熒光檢測陽性率為3.3[％](5/121)，PCR檢測結(jié)果顯示：PCR檢測結(jié)果陽