大豆農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化RNAi花葉病毒衣殼蛋白基因研究.pdf

1、大豆花葉病毒病由大豆花葉病毒(Soybean mosaic virus，SMV)引起，是世界范圍大豆生產(chǎn)區(qū)的主要病害之一。大豆花葉病毒屬于馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus），可通過受侵染的種子，蚜蟲和機械接種傳播，它不僅會引起大豆植株矮化、葉片皺縮、花葉、頂枯等癥狀，而且還會使大豆種粒斑駁，降低大豆的產(chǎn)量及其外觀品質(zhì)，大豆花葉病毒病一般會造成病田減產(chǎn)10％-30％，嚴重時甚至造成大面積絕產(chǎn)，給大

2、豆生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失，全球范圍內(nèi)大豆種質(zhì)交流和新的強毒力病毒株系的不斷出現(xiàn)，使大豆安全生產(chǎn)面臨挑戰(zhàn)。種植抗病毒品種是防治大豆花葉病毒病最根本的有效策略。
　　 RNA干擾(RNA interference，RNAi)是多種生物體內(nèi)由雙鏈RNA(double-strandedRNA，dsRNA)介導的同源mRNA降解現(xiàn)象，是植物體內(nèi)天然的抗病毒機制。由此發(fā)展起來的RNAi技術(shù)已成為當今植物基因功能研究和遺傳改良的一個重要手段。

3、RNAi技術(shù)可以有效地應用于大豆抗病毒分子育種中，創(chuàng)制優(yōu)良的抗大豆花葉病毒病的大豆新種質(zhì)。
　　 本研究以RNA干擾大豆花葉病毒衣殼蛋白(Coat protein，CP)基因為表達載體，Bar基因作為篩選標記基因，采用農(nóng)桿菌介導大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，獲得了22株T0代大豆生根苗;這些T0代大豆生根苗經(jīng)草丁膦涂抹法、PCR法和Bar試紙條法鑒定，均一致表明，其中18株大豆生根苗為T0代RNAi CP轉(zhuǎn)基因植株;RNAi CP轉(zhuǎn)基因株

4、系在T1代的遺傳分析表明，轉(zhuǎn)入的基因片段可遺傳，且遺傳規(guī)律符合孟德爾定律;SouthernBlot試驗表明導入的干擾片段在大豆基因組DNA中為單拷貝;大豆花葉病毒摩擦接種試驗表明，RNAi CP轉(zhuǎn)基因植株初步具有抗大豆花葉病毒特性，摩擦接種3周后，DAS-ELISA檢測表明，RNAi CP轉(zhuǎn)基因植株的大豆花葉病毒陽性檢出率為7.69％，而非轉(zhuǎn)基因植株的大豆花葉病毒檢出率為100％。
　　 本研究獲得的RNAi CP轉(zhuǎn)基因大豆材料