石斛蘭花期和花色的轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、Y7 8 3 8 8 0分桊暈S 6 鴕．3 1 ：Q 9 4 3 ，2四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)號(hào)8 2 0 0 2 2 1 0 1 7石斛蘭花期和花色的轉(zhuǎn)基因研究聶奪容2 0 0 5 車(chē)5 月A b s t r a c tA so n e o f i m p o r t a n to r n a m e n t a l p l a n t s ，O r c h i d sh a v ea ni m p o r t a n tc o

2、m m e r c i a li m p o r t a n c e i n w o r l d f l o w e ri n d u s t r y 。T a x o n o m i c a l l y ，O r c h i d a c e a e i s t h e l a r g e s tf a m i l yo f f l o w e r i n gp l a n t sa m o n g m o n o c o t y l

3、e d o n s ，w h i c h o c c u p i e sw i d er a n g e so fe c o l o g i c a lh a b i t a t s a n de x h i b i t s h i g h l ys p e c i a l i z e d m o r p h o l o g i c a l ，s t r u c t u r a l ，a n dp h y s i o l o g i c

4、 a l c h a r a c t e r i s t i c s ．I ti s 黻i d e a l m a t e r i a lt os t u d yf l o w e r p i g m e n t a t i o na n do v u l ei n i t i a t i o na n dd e v e l o p m e n t ．T h e i n e f f i c i e n tt r a n s f o r

5、m a t i o no f o r c h i d s ，h o w e v e r ,h a m p e r e dt h ei n v e s t i g a t i o no fo r c h i dg e n ef u n c t i o na n dr e g u l a t i o n i n v i v o ．O r c h i db r e e d i n gb yt r a d i t i o n a ls e x

6、u a l h y b r i d i z a t i o nw a st i m e - c o n s u m i n g d u et o t h e l o n gg r o w t ha n dr e p r o d u c t i v e c y c l e o ft h e s e p l a n t s ，m e a nw h i l eg e n e t i c e n g i n e e r i n gm e t h

7、 o d o f f e r s a n e f f e c t i v e w a y t o i n t r o d u c e n o v e lc h a r a c t e r s i n t o o r c h i d s ．U n 刪r e c e n t l yt r a n s g e n i co r c h i dp l a n t sh a v e b e e n r e p o r t e df o r o n

8、 l y n i n eg e n e r a o f o r c h i d s ．D e n d r o b i u m o r c h i d s a r et h e f i r s t l yg e n e r a i nO r c h i d a c e a e p l a n t si nt e r m s o f t h e i ra m o u n t s ．O r c h i d sa r ev a l u a b

9、l eo r n a m e n t a lp l a n t s ，g l o b a l l yu s e d ．a(chǎn) S c u tf l o w e r sa n dp o t t e dp l a n t s ．W es u c c e s s f u l l yt r a n s f o r m e dt w oD e n d r o b i u r ao r c h i d s ( D e n d r o b i u mp

10、h a t a e n o p s i sB a n y a n P i n k a n d D e n d r o b i u mn o b i l e ) w i t h a r e l a t i v e l yh i g he f f i c i e n c yv i aA g r o b a c t e r i u m ‘m e d i a t e d t r a n s f o r m a t i o n ．T h ep r

11、 o t o c o l s p r o v i d e dh e r e a r es i m p l e ，r e p e a t a b l ea n de f f e c t i v e ．I no r d e rt o a l t e rt h ef l o w e rc o l o ra n df l o w e r i n gt i m eo fD e n d r o b i u mo r c h i d s , 訛t r

12、 a n s f o r m e dt h eo r c h i d so f D e n d r o b i u m p h a l a e n o p s i sa r i dD e n ．n o b i l e w i t h t h eC H S A ( c h a l e o n es y n t h a s e A ) g e n ea n dt h e f l o r a l m e d s t e mi d e n t

13、i t y g e n eA P I v i aA g r o b a c t e r i u m - m e d i a t e d t r a n s f o r m a t i o n o fp r o t o c o r m ·- l i k eb o d i e s ( P L B s ) a n d c a l l u s ，r e s p e e t i v e l y 。T h eC H S Ag e n e

14、嘲c l o n e df r o mP e t u n i a緲打i a , a n d t h e A P t g e n ew a s c l o n e d f r o mA r a b i d o p s i s 。A r a t h e rh i 醢t r a n s f o r m a t i o ne f f i c i e n c yo f 1 8 ．3 ％w i t h A P l a n d1 6 ．7 ％w i

15、t hC 瑚W a S o b t a i n e d ．I n t e g r a t i o no f A P It r a n s g e n e s w e r ee o r d i r m c d i n t r a n s g e n i c D 。n o b ／／e o r c h i d p l a n t s b yS o u t h e r nh y b r i d i z a t i o n ．T h e c o

16、p yn u m b e ro ft h ei n t e g r a t e d g e n e sr a n g e d f r o mo n e t o f o u r ,i n d i c a t i n ga m u l t i p l ei n s e r t i o n o f t h eg e n e s a n di n d e p e n d e n t t r a n s f o r m a t i o n e v