小菜蛾解毒代謝相關(guān)miRNA鑒定及表達(dá)分析.pdf

1、小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）是世界性遷飛害蟲，主要危害十字花科蔬菜，寄主已多達(dá)40多種，且適應(yīng)性很強(qiáng)，已經(jīng)對幾乎所有生產(chǎn)上使用的化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥 Bt產(chǎn)生了顯著抗性。MicroRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性的長度約為19-23 nt的單鏈非編碼小分子 RNA，通過堿基互補(bǔ)配對原則與相應(yīng)的靶基因的mRNA（messenger RNA，mRNA）結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控靶基因的表達(dá)。研究表明，昆蟲體內(nèi)的解毒代謝蛋白家族主要

2、包括細(xì)胞色素單加氧酶（cytochrome P450 monooxygenases，P450）、羧酸酯酶（Carboxylesterases，CarEs）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（Glutathione S-transferases，GSTs）以及ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ATP-binding cassette transporters，ABC transporters）。目前對于參與解毒代謝的miRNA尚不清楚。本研究基于敏感品系和抗性品系小菜蛾

3、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，篩選、鑒定出小菜蛾體內(nèi)與解毒代謝相關(guān)的多個miRNA，初步探討了這些miRNA與小菜蛾解毒代謝的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：
　　1．通過對不同品系中具有高差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行篩選，得到了17個顯著差異表達(dá)的miRNA。進(jìn)而對這些差異顯著的miRNA進(jìn)行家族分析，發(fā)現(xiàn)這些家族的基因保守性高，且進(jìn)化的距離與其物種的親緣關(guān)系有關(guān)。
　　2．通過對篩選出的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測，得到了1,072個靶基因。進(jìn)一步對差異

4、miRNA的靶基因進(jìn)行篩選，靶定到參與解毒代謝的4個基因家族、6個miRNA及48個靶基因。把48個靶基因與6個miRNA進(jìn)行數(shù)字表達(dá)量及結(jié)合位點分析，篩選得到了5個miRNA及9個靶基因。
　　3．把篩選后的miRNA及其靶基因進(jìn)行實時熒光定量PCR檢測，其中5個miRNA的表達(dá)趨勢與數(shù)字表達(dá)譜一致，9個靶基因在毒死蜱抗性品系均為上調(diào)表達(dá)，而在氟蟲腈抗性品系有1個基因的表達(dá)為下調(diào)，其余8個基因為上調(diào)。
　　本研究篩選得到小