T-2毒素誘導凡納濱對蝦肌肉蛋白質變化的規(guī)律.pdf

1、飼料中T-2毒素污染情況嚴重,而T-2毒素可通過抑制DNA和RNA的合成,阻斷翻譯的啟動來抑制蛋白質的合成,T-2毒素在對蝦體內蓄積的過程也是肌肉品質變化的過程,對蝦長期暴露T-2毒素污染的飼料勢必造成品質劣化。
　　本研究以凡納濱對蝦為研究對象,設定不同T-2毒素暴露劑量(0、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg·feed)的人工染毒飼料,提取染毒組和對照組的對蝦肌肉蛋白質分類成分,以凱氏定氮法和考馬斯亮藍法測定其含量,

2、采用 SDS-PAGE電泳分析可溶性蛋白質構成變化,并采用常規(guī)理化方法對肌動球蛋白的ATPase活性、巰基含量和ATP感度進行分析。結果表明T-2毒素對肌肉蛋白質分類成分影響顯著(p<0.05),高劑量組T-2毒素引起肌動球蛋白降解,在水溶性蛋白中的42 kD條帶灰度與T-2毒素暴露劑量具有相關性,有望作為評價T-2毒素誘導凡納濱對蝦肌肉品質變化的潛在指示物。T-2毒素均對蛋白質性質有顯著性影響(p<0.05),而且隨T-2毒素暴露劑量

3、增加,Mg2+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性逐漸降低。因此Mg2+相關的目標酶,可作為評價T-2毒素誘導凡納濱對蝦肌肉蛋白質品質變化的參考指標。
　　本研究建立及優(yōu)化了凡納濱對蝦肌肉蛋白質雙向電泳分離技術,結果表明:以液氮研磨+超聲破碎的提取方式,7M尿素和2M硫脲為主的裂解液提取凡納濱對蝦肌肉全蛋白,采用7 cm,pH4-7 IPG膠條,180μg被動水化上樣,12.5％二向分離膠和膠體考染的方式,成功得到

4、分離度和分辨度較高的2-DE圖譜,為進一步探索T-2毒素誘導凡納濱對蝦肌肉品質變化及篩選標記蛋白奠定了基礎。
　　采用已建立的凡納濱對蝦肌肉蛋白質雙向電泳分離技術對不同劑量組凡納濱對蝦肌肉蛋白質進行分離,得到30個差異蛋白,其中與T-2毒素相關的差異蛋白點12個。應用激光解吸基質輔助飛行時間質譜聯(lián)用技術(MALDI-TOF/TOF)對12個差異蛋白點進行質譜分析得到其肽指紋圖譜和二級質譜,通過MASCOT軟件搜索數(shù)據(jù)庫同已得到的肽

5、指紋圖譜進行比對分析,共鑒定出11個蛋白點,1個未知蛋白,11個蛋白質點的同源蛋白分別是小泛素樣修飾物-1(SUMO-1)、精氨酸激酶、磷酸丙糖異構酶、抑制蛋白112、精氨酸激酶B鏈、70kD熱休克蛋白(部分)和卵黃蛋白原。12個蛋白點的表達量隨 T-2毒素暴露劑量增加均呈先上調后下調趨勢,而其中編號2288差異蛋白點(精氨酸激酶)在暴露于T-2毒素低劑量時表達上調,而暴露在中高劑量時,蛋白點消失,說明精氨酸激酶對中高劑量T-2毒素表現(xiàn)