天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆及其在肌肉組織和部分器官中的表達(dá)分析.pdf

1、肉質(zhì)是畜禽生產(chǎn)的重要經(jīng)濟(jì)性狀，其中一個重要的影響因素就是肌纖維。肌纖維類型與肉質(zhì)的關(guān)系十分密切，其中慢肌纖維比例高的肌肉肉質(zhì)更好，它是在很多基因控制下的產(chǎn)物。鈣調(diào)磷酸酶（calcineurin，CaN）是一種常見的細(xì)胞信號分子，它參與的CaN/NFAT信號通路可以影響肌纖維類型，尤其是對促進(jìn)慢肌纖維的轉(zhuǎn)變有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)鈣調(diào)磷酸酶肌小節(jié)結(jié)合蛋白基因家族（MYOZs）可以通過改calcineurin的活性來影響肌纖維類型的轉(zhuǎn)變，從而

2、影響畜禽的肉質(zhì)。為了探究天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因在肌纖維轉(zhuǎn)化方面的作用，本試驗(yàn)利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)、分子克隆、實(shí)時熒光定量(RT-qPCR)以及蛋白免疫印跡法(western blotting)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)對MYOZ2基因和MYOZ3基因進(jìn)行了初步的研究，結(jié)果如下:
　　1.本研究成功獲得天府肉羊MYOZ2

3、基因和MYOZ3基因的cDNA全部編碼序列，MYOZ2基因序列長856bp，包含一個長度為795bp的ORF框，編碼264個氨基酸;MYOZ3基因序列長為832bp，含有一個大小為735bp的ORF框，編碼244個氨基酸。將其提交至NCBI，獲得兩個基因的登錄，分別是JX573191和KC537058。
　　2.核酸序列和氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)MYOZ2基因較MYOZ3基因更加保守;系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，MYOZ2和MYOZ3與綿羊的親緣

4、關(guān)系最近，與爪蟾的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。
　　3.蛋白性質(zhì)和結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白都含有若干個磷酸化位點(diǎn)，都是親水蛋白，不含跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽序列以及糖基化位點(diǎn)，而且它們具有相同的Calsarcin保守結(jié)構(gòu)域，二級結(jié)構(gòu)上都包含α-螺旋、無規(guī)卷曲及延伸片斷三種形式，且以前兩者為主。
　　4.利用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測了MYOZ2基因和MYOZ3基因在300日齡8個不同組織中的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示MYOZ2基因在天

5、府肉羊的腹直肌和心肌中有較高水平的表達(dá)，股二頭肌和背最長肌的表達(dá)量較低，而肝臟、脾臟、肺和腎臟的表達(dá)量極其微少;MYOZ3基因在腹直肌中表達(dá)量最高，股二頭肌、腎臟、肺、背最長肌和脾臟中的表達(dá)量也較高，心肌和肝臟中幾乎沒有表達(dá)。在不同的日齡的4種不同肌肉組織中，MYOZ2基因和MYOZ3基因的表達(dá)量變化波動各不相同。
　　5.使用蛋白免疫印跡方法檢測天府肉羊MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白在300日齡8個不同組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示