柑橘全爪螨抗藥性監(jiān)測及其細胞色素P450基因的克隆.pdf

1、柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)是一種對柑橘危害嚴重的世界性害螨。該螨的抗藥性問題已引起全世界范圍內(nèi)的科學工作者及管理部門的高度重視。本學位論文采用玻片浸漬法測定了柑橘全爪螨田間種群對常用殺螨劑的敏感性，比較研究了取食不同柑橘種質(zhì)資源的柑橘全爪螨對殺螨劑的敏感性差異，同時測定了磷酸三苯酯(TPP)、順丁烯二酸二乙酯(DEM)和增效醚(PBO)3種增效劑對殺螨劑的增效作用，研究的目的旨在掌握柑橘全爪螨對殺螨劑

2、的抗藥性水平及其抗藥性形成的生理生化機制，為柑橘全爪螨的抗藥性治理提供依據(jù)。此外，利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆獲得了柑橘全爪螨細胞色素P450基因cDNA全長和片段各1條，為進一步研究P450基因介導柑橘全爪螨抗藥性的分子機制提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 ㈠柑橘全爪螨田間種群對常用殺螨劑的敏感性監(jiān)測：⑴柑橘全爪螨對4種殺螨劑的敏感性監(jiān)測。2008-2009年兩年敏感性監(jiān)測結(jié)果顯示，柑橘全爪螨對供試的4種殺螨劑中

3、的甲氰菊酯(菊酯類農(nóng)藥)敏感性下降最快，LC50值在兩年間分別為4.93 mg·L-1和25.17 mg·L-1，相對抗性達5.1倍；其次是噠螨酮(雜環(huán)類農(nóng)藥)，LC50值分別為3.78 mg·L-1和8.38 mg·L-1，相對抗性達2.2倍；柑橘全爪螨對阿維菌素(生物源類農(nóng)藥)的敏感性基本維持不變；而對甲維鹽(半合成抗生素類農(nóng)藥)的敏感性卻有所上升，2009年柑橘全爪螨對甲維鹽的相對敏感性是2008年的1.4倍。⑵取食不同柑橘種質(zhì)資

4、源的柑橘全爪螨對常用殺螨劑的敏感性測定。采自不同柑橘種質(zhì)資源上的柑橘全爪螨對甲氰菊酯和噠螨酮均存在一定的敏感性差異。柑橘全爪螨不同食物種群對甲氰菊酯的敏感性由高到低依次為柚、橘和枳殼，其中枳殼種群對甲氰菊酯的相對抗性是柚種群的2.34倍；對噠螨酮的敏感性由高到低依次為柚、枳殼和橘種群，其中橘種群對噠螨酮的相對抗性是柚種群的3.92倍；而取食柑橘不同種質(zhì)資源的柑橘全爪螨對阿維菌素的敏感性并無顯著差異。
　　 ㈡三種增效劑對常用殺螨

5、劑的增效作用。增效劑增效作用測定結(jié)果表明，TPP對甲氰菊酯、阿維菌素和甲維鹽有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為3.2倍、2.0倍和3.8倍。DEM對噠螨酮和甲維鹽具有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為3.3倍和2.6倍。PBO對甲氰菊酯、噠螨酮和甲維鹽有顯著的增效作用，增效倍數(shù)分別為2.7倍、2.4倍和7.2倍。PBO對阿維菌素有一定的增效效果，其增效倍數(shù)為1.7倍。而TPP對噠螨酮以及DEM對甲氰菊酯和阿維菌素均無增效作用。
　　

6、㈢柑橘全爪螨細胞色素P450基因的克隆。利用RT-PCR，克隆獲得了2條柑橘全爪螨P450基因片段N1和N2，GenBank登錄號分別為FJ480403和FJ480404。通過RACE技術(shù)，克隆得到了N2的全長序列，該全長基因被命名為CYP4CF1，其序列全長1880 bp，包括1527 bp編碼508個氨基酸的開放閱讀框，87 bp的5'端非編碼區(qū)長，286 bp的3'端非編碼區(qū)，起始密碼子ATG，終止密碼子TAA。在其核酸序列3'末