柞蠶細胞色素P450基因CYP4G25序列的克隆與表達分析.pdf

1、細胞色素P450單加氧酶系(cytochrome P450 monooxygenases，P450s)為廣泛分布于生物有機體內(nèi)的重要酶系。細胞色素P450基因起源于35億年前的一個共同祖先，是最古老和最龐大的超基因家族之一。細胞色素P450參與許多重要的生命過程，對動物、植物、真菌和細菌等的研究表明許多不同催化反應(yīng)都有細胞色素P450的參與。對于昆蟲而言，細胞色素P450在昆蟲的生命活動中起著十分重要的作用：主要涉及生長、發(fā)育、取食等過

2、程，其對異生物質(zhì)的代謝特性導(dǎo)致了昆蟲對殺蟲劑的抗藥性和對植物有毒物質(zhì)的耐受性，它還參與了昆蟲體內(nèi)保幼激素、蛻皮激素和脂肪酸等內(nèi)源化合物的合成與代謝，具有重要的生物學(xué)和遺傳學(xué)意義。
　　 柞蠶是一種正在開發(fā)的野生絹絲昆蟲，屬于鱗翅目、大蠶蛾科、柞蠶屬的泌絲昆蟲。除了作為紡織工業(yè)原料利用外，還有很高的藥用和食用等經(jīng)濟價值。利用分子生物學(xué)和生物信息學(xué)方法對柞蠶P450基因進行研究，獲得的主要結(jié)果如下：
　　 1．CYP4G25

3、基因的克隆及序列分析：
　　 采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆獲得了1個P450新基因CYP4G25的全長序列。CYP4G25全長2112bp，GenBank登錄號為GU205081，包括由111個核苷酸組成的5’端非編碼區(qū)(5’UTR)、由1674個核苷酸組成的ORF(開放閱讀框)編碼557個氨基酸，分子量大小為63.6KD和等電點為8.6，以及由326個核苷酸組成的3’端非編碼區(qū)(3’UTR)。通過生物在線網(wǎng)站Ex

4、pasy分析氨基酸序列：含有血紅素結(jié)合位點，螺旋I、螺旋K、螺旋C以及N 端含有由22個疏水氨基酸組成的跨膜錨定區(qū)域。構(gòu)建系統(tǒng)進化樹分析得到柞蠶和天蠶親緣關(guān)系最近。
　　 2.CYP4G25基因的表達分析：
　　 提取柞蠶不同時期和不同組織的總RNA，以M-MLV反轉(zhuǎn)錄第一鏈cDNA，以柞蠶Actin基因做內(nèi)參，進行了半定量RT-PCR。實驗結(jié)果顯示，選取的組織基本都有表達，在脂肪體、表皮。中腸、血液、絲腺、觸角、精巢和