乙酰膽堿酯酶的動力學機制及其應用.pdf

1、為深入了解殺蟲劑靶標酶抗藥性機制，本文采用的是改進的Ellman比色法，通過乙酰膽堿酯酶(·ACHE)動力學模型得到的一系列動力學參數(shù)：米氏常數(shù)K<,m>，最大反應速率V<,max>，轉(zhuǎn)換率K<,cat>，特異性常數(shù)K<,cat>/K<,m>，雙分子速率常數(shù)K<,i>，抑制劑化合物對AChE活性部位的親和力常數(shù)K<,a>，磷酸化或氨基甲酸化速率常數(shù)K<,2>，分析家蠅(Musca domestica)對有機磷(OPs)和氨基甲酸酯(CB

2、s)類殺蟲劑的抗藥性。以酶特異性常數(shù)作為AChE催化特性變化的檢驗標準，建立了應用AChE篩選新農(nóng)藥的離體篩選模型。并應用AChE動力學模型來探究敏感(SS)家蠅，抗性(RR)家蠅和電鰩AChE對有機磷(OPs)和氨基甲酸酯(CBs)類殺蟲劑不同的選擇性，尋求對抗性害蟲高效而對人畜低毒的化合物結(jié)構(gòu)特點。本論文的主要結(jié)果如下： 1、從抗性譜可以看出，R品系對未用于選育的OPs也產(chǎn)生高交互抗性。表明其抗性可能主要是由于其靶標酶ACh

3、E敏感性減低所致。 2、從R和S品系AChE的性質(zhì)研究表明，R品系AChE的最適溫度是37℃，而S品系為34℃；R和S品系ACHES寸三種底物的水解作用也有一定的差異。 3、從R和S品系AChE的一系列動力學參數(shù)研究表明，R和S品系AChE在質(zhì)上是不同的，即R品系AChE已經(jīng)發(fā)生變構(gòu)，從而對OPs和CBs的親和力下降，OPs和CBs對AChE的抑制作用降低，這是R品系對OPs和CBs產(chǎn)生抗性的主要實驗證明。 4、

4、應用K<,i>研究了OPs和CBs殺蟲活性與結(jié)構(gòu)的關系。 5、基于R、S品系AChE和脊椎動物(電鰩)AChE的特性和動力學參數(shù)，建立了用于篩選反抗性化合物和高選擇性化合物的AChE篩選模型，并可用于高效、微量篩選。 6、通過對比SS家蠅、RR家蠅、電鰩AChE與16種商品化的抑制劑間的不同抑制作用，發(fā)現(xiàn)敵敵畏和毒死蜱-氧具有對RR家蠅敏感度高，而對電鰩敏感度低的特性，這種結(jié)構(gòu)與作用靶標之間的相互關系，為新農(nóng)藥的創(chuàng)制，特