固定化乙酰膽堿酯酶的制備及其性質(zhì)研究.pdf

1、固定化酶作為現(xiàn)代生物工程技術(shù)的重要組成部分之一,在工業(yè)、醫(yī)學(xué)、分析與分離技術(shù)以及化學(xué)合成等領(lǐng)域有著廣泛的用途.該文從固定化乙酰膽堿酯酶的制備,酶固定后性質(zhì)的變化,固定化酶的應(yīng)用等方面內(nèi)容進(jìn)行了的研究.一、甲殼胺固定化乙酰膽堿酯酶的制備與性質(zhì)該文以來源于電鰻的乙酰膽堿酯酶為模型酶,以甲殼胺為模型載體,將乙酰膽堿酯酶固定在甲殼胺上.以甲殼素為原料,與濃堿反應(yīng),經(jīng)過純化制備了高脫乙酰度的甲殼胺.再以甲殼胺為載體,通過戊二醛交聯(lián),制備了甲殼胺固

2、定化乙酰膽堿酯酶,考察了固定化條件對固定化酶活力的影響,研究了固定化酶的性質(zhì).固定化酶與溶液酶的最適溫度基本相同,均為37℃;固定化酶最適pH為8.2,溶液酶為8.0;固定化酶在50℃仍有較高熱穩(wěn)定性,而溶液酶活力明顯下降;固定化酶活力回收約為44.66％,在重復(fù)使用8次后仍能保持原有活力的50％.二、甲殼胺固定化乙酰膽堿酯酶的動(dòng)力學(xué)研究對固定化酶和溶液酶進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)研究,測定了它們的米氏常數(shù),最大反應(yīng)速度.固定化酶的Km為0.84mm

3、ol·L<'-1>,Vmax為2.11U·g<'-1>;溶液酶的Km為1.16mmol·L<'-1>,Vmax為3.87U·mL<'-1>.固定化酶的Km和Vm均低于溶液酶,說明固定化處理改變了酶對底物的親和力,并使酶的活力降低了.三、固定化乙酰膽堿酯酶對有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測采用自制的固定化乙酰膽堿酯酶,用酶抑制法對甲胺磷的測定進(jìn)行了初步的研究,并考察了底物溶液的貯存穩(wěn)定性及顯色后的穩(wěn)定性.抑制方程為y=0.1637*1gC+0.8764,

4、r=0.9889;pI<,50>為8.3.四、針型傳感器在體測定小鼠肌肉組織中鈣離子的研究鈣離子傳感針是根據(jù)涂絲微電極的原理,以針灸針作為基體,將一定量的敏感材料、增塑劑、添加劑等溶于溶劑中制成敏感膜溶液,采用仿雙層類脂膜(BLM)技術(shù)使其同定于針灸針尖端上而制成的鈣離子傳感針.用該傳感針測葡萄糖酸鈣片溶液的鈣離子濃度時(shí),其線性范圍為10<'-5>—10<'-2>mol/L,響應(yīng)時(shí)間為5秒左右.該實(shí)驗(yàn)通過將該傳感針直接插入小白鼠大腿肌肉