cry4B基因的克隆、表達(dá)及其在蕈蚊中受體的初步分析.pdf

1、厲眼蕈蚊（Lycoriella sp.）是危害食用菌的一種雙翅目害蟲(chóng)，它以幼蟲(chóng)取食食用菌，對(duì)食用菌產(chǎn)量造成嚴(yán)重的影響。本研究采用山藥作為眼蕈蚊的飼料，通過(guò)控制溫度和濕度的變化，選出最佳飼養(yǎng)條件，即在濕度為80％，溫度25℃的條件下，幼蟲(chóng)的存活率和存活歷期均最長(zhǎng)，短期內(nèi)建立種群，在試驗(yàn)室進(jìn)行蕈蚊的大量飼養(yǎng)。
　　蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt）LLP29是一株高效殺蚊菌株。經(jīng)前期試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)濃度

2、較高的LLP29菌株發(fā)酵液能較好地控制眼蕈蚊的幼蟲(chóng)。Bt LLP29菌株Cry4B具有較高的殺蟲(chóng)毒性。本研究根據(jù)cry4B基因序列設(shè)計(jì)的特異性引物，成功克隆了LLP29特有的cry4B基因，并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)cry4B基因和已報(bào)道的cry4B之間的同源性高達(dá)99%，同時(shí)還揭示出了cry4B基因及其編碼蛋白的一些生物和理化性質(zhì)，表明該蛋白不含信號(hào)肽，無(wú)跨膜區(qū)域。通過(guò)氨基酸分值高低，得出該蛋白為親水性蛋白。結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)表明Cry

3、4B由Endotoxin_N、Endotoxin_M和Endotoxin_C3個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。它其與其他Bt cry同源基因的相似性差異較大。與Cry4Ba的相似性最高為99%。通過(guò)原核表達(dá)獲得Cry4B殺蚊蛋白，以眼蕈蚊為靶標(biāo)進(jìn)行生物測(cè)定，其LC50達(dá)1160 ng/mL。運(yùn)用生物素-親和素沉降試驗(yàn)，成功分離到兩個(gè)Cry4Ba結(jié)合蛋白。但可能是結(jié)合蛋白濃度偏低，質(zhì)譜檢測(cè)，未能獲得有效數(shù)據(jù)。本研究利用Cry4B毒素蛋白，通過(guò)Pulls d