枇杷磷酸果糖激酶基因的分離及表達分析.pdf

1、枇杷果實由于果肉柔軟多汁，酸甜適度，味道鮮美，深受人們的喜愛，但我國多數(shù)枇杷品種果實含糖量低，風(fēng)味偏淡，這在一定程度上制約了枇杷的發(fā)展。磷酸果糖激酶是糖酵解過程中最重要的調(diào)節(jié)酶之一，調(diào)節(jié)糖酸之間的平衡，糖酵解速度主要決定于該酶活性，它是一個限速酶，對糖酵解起關(guān)鍵作用，因此研究磷酸果糖激酶基因的功能及對枇杷糖代謝的分子調(diào)控機理，對提高果實品質(zhì)具有重要意義。
　　 本研究以浙江農(nóng)林大學(xué)成年枇杷樹為材料，克隆磷酸果糖激酶基因，分析其在

2、果實發(fā)育過程中的表達水平，探索其在枇杷果實糖代謝中的分子調(diào)控機制，研究結(jié)果如下：⑴采用RACE技術(shù)從枇杷中分離得到磷酸果糖激酶基因的全長cDNA序列，該基因長度為1876bp，其中含有一個1710bp完整開放閱讀框，共編碼569個氨基酸，5'UTR區(qū)88bp，3'UTR區(qū)78bp，含有一個poly(A)尾，對該序列進行分析，分析顯示枇杷磷酸果糖激酶基因編碼蛋白與其他植物磷酸果糖激酶蛋白的相似性達70％-90％以上。聚類分析表明，枇杷Ej

3、PFPb基因編碼蛋白與蓖麻、楊樹等植物的EjPFPb蛋白遺傳距離較近，與煙草等距離較遠。⑵利用熒光核酸原位雜交技術(shù)明確基因亞細胞分布及表達豐度，探索其在細胞中的作用機制，結(jié)果表明轉(zhuǎn)入了載體的融合蛋白在細胞膜中是可見的。利用Real-TimeRT-PCR技術(shù)分析果實發(fā)育進程中磷酸果糖激酶基因動態(tài)表達，結(jié)果顯示枇杷兩個品種在果實發(fā)育的不同階段，EjPFPb基因表達水平不同。⑶利用煙草遺傳轉(zhuǎn)化體系對磷酸果糖激酶基因功能進行分析，建立了一套高效