枇杷果實(shí)香氣檢測及AAT1基因克隆表達(dá)與酶活性分析研究.pdf

1、枇杷(Eriobotrya japonica(Thunb.) Lindl)原產(chǎn)于我國，在我國已有3000多年的栽培歷史。其果肉酸甜多汁，清香怡人，頗受人民喜愛。目前關(guān)于枇杷果實(shí)的研究多在于糖酸代謝以及采后儲藏等方面，有關(guān)枇杷果實(shí)香氣的研究相對較少。本研究以枇杷果實(shí)為試材，利用生理生化和分子生物學(xué)等技術(shù)在對果實(shí)品質(zhì)指標(biāo)、色澤指標(biāo)的測定基礎(chǔ)上，對不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)香氣以及不同品種成熟期果實(shí)香氣進(jìn)行分析，并進(jìn)行枇杷果實(shí)醇?；D(zhuǎn)移酶基因（Alco

2、hol acyltransferase,AAT）的基因克隆和表達(dá)研究，主要研究結(jié)果如下:
　　1、對‘金豐一號’和‘豐玉’兩個(gè)枇杷品種4個(gè)發(fā)育時(shí)期的果實(shí)品質(zhì)進(jìn)行檢測，結(jié)果表明:從5月1日到5與22日，‘金豐一號’和‘豐玉’的單果重、縱橫徑、TSS（可溶性固形物）的值呈增大趨勢，而硬度值呈減小趨勢;‘金豐一號’在4個(gè)發(fā)育時(shí)期的單果重、縱徑、橫徑的值都大于‘豐玉’，‘金豐一號’與‘豐玉’枇杷果實(shí)的可溶性固形物的含量在5月15日到5月2

3、2日期間都迅速上升，到達(dá)5月22日后，豐玉枇杷果實(shí)的可溶性固形物含量高于‘金豐一號’;在4個(gè)發(fā)育時(shí)期，‘金豐一號’枇杷果皮的顏色與‘豐玉’枇杷果皮的顏色差別不大，但‘金豐一號’枇杷果肉的顏色至5月15日起比‘豐玉’枇杷果肉的顏色更偏向紅黃色。
　　在對23個(gè)紅沙類及白沙類枇杷品種成熟期果實(shí)的檢測中發(fā)現(xiàn)，紅沙類品種的單果重、縱橫徑、硬度的平均值都比白沙類品種的要大，而白沙類品種的TSS的平均值卻高于紅沙品種;色差分析顯示，就整體而言

4、，紅沙類品種果皮顏色相差不大，果肉顏色的明亮度均低于白沙類品種，更接近于紅黃色。
　　2、采用GC-MS檢測果實(shí)芳香成分，結(jié)果表明:‘金豐一號’和‘豐玉’枇杷果肉在5月1日和5月8日檢測到相對含量最高的香氣物質(zhì)都是2-己烯醛，在5月15日和5月22日檢測到相對含量最高的香氣物質(zhì)都是(E)-3-己烯-1-醇，在所檢測的4個(gè)發(fā)育階段，這兩個(gè)枇杷品種的果皮中相對含量最高的香氣物質(zhì)都是己烯醛。
　　在23個(gè)成熟期枇杷品種的果皮和果肉

5、主要香氣成分中，相對含量最高的都是醛類物質(zhì)，其次是烴類物質(zhì);枇杷果肉中相對含量最高的物質(zhì)不一定相同，在10個(gè)紅沙類枇杷品種果肉的香氣成分檢測中相對含量最大的物質(zhì)是壬醛的有7種，在13個(gè)白沙類枇杷品種果肉的香氣成分檢測中相對含量最大的是壬醛也有7種，此外，壬醛在剩余的其它枇杷品種中的相對含量也較大;實(shí)驗(yàn)所檢測的所有成熟期枇杷品種的果皮香氣成分中相對含量最大的都是2-己烯醛。
　　3、克隆獲得枇杷AAT1基因全長，命名為EjAAT1，

6、該cDNA序列全長1649 bp，具有一個(gè)完整的1372 bp開放閱讀框，編碼458個(gè)蛋白質(zhì)且3'端具有PolyA尾巴(12 bp)，登錄序列號為KF704125.2，該序列與蘋果、番茄、甜橙的AAT1基因核苷酸序列的同源性分別為:95％、68％、67％。
　　4、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對‘金豐一號’和‘豐玉’不同發(fā)育時(shí)期果肉以及果皮進(jìn)行EjAAT1表達(dá)分析，結(jié)果顯示EjAAT1基因子‘金豐一號’果肉中的相對表達(dá)量在5月15日的相

7、對表達(dá)量最高，果皮中相對表達(dá)量最高的是5月22日;EjAAT1基因在‘豐玉’果肉中相對表達(dá)量最高的是5月22日，而在果皮中，相對表達(dá)量最高的是5月1日。對‘金豐一號’和‘豐玉’4個(gè)發(fā)育時(shí)期果肉中醇?；D(zhuǎn)移酶活性進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示‘金豐一號’果肉中醇酰基轉(zhuǎn)移酶活性最高的是在5月8日，在5月1日酶活性最低;‘豐玉’果肉中醇?；D(zhuǎn)移酶活性隨著果實(shí)發(fā)育而遞減，酶活性最高的是在5月1日，最低在5月22日。
　　對‘金豐一號’和‘豐玉’4個(gè)發(fā)