抗性相關(guān)大豆miRNA的克隆和表達(dá)特征分析.pdf

1、microRNA(miRNA)是一類結(jié)構(gòu)相當(dāng)保守、長度約為21個核苷酸的內(nèi)源單鏈非編碼RNA，可通過調(diào)控細(xì)胞中與某信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)mRNA，指導(dǎo)靶基因的切割或降低靶基因的翻譯，在轉(zhuǎn)錄后水平抑制植物基因表達(dá)，從而影響植物形態(tài)發(fā)生、發(fā)育過程、適應(yīng)環(huán)境的能力和激素信號傳導(dǎo)等，是一種新的基因調(diào)控模式。 從2002年證實(shí)miRNA在植物中的存在以來，關(guān)于植物miRNA的研究進(jìn)展異常迅速，短短幾年內(nèi)就已發(fā)現(xiàn)了200多種。植物在進(jìn)化過程中為了

2、適應(yīng)各種環(huán)境產(chǎn)生了復(fù)雜的適應(yīng)機(jī)制，體現(xiàn)在分子水平上主要通過轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控眾多相關(guān)基因的表達(dá)來抵抗各種環(huán)境脅迫。如機(jī)械力、干旱、鹽堿、低溫等非生物脅迫在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后調(diào)控植物特定基因的表達(dá)，這些基因的表達(dá)反過來又賦予植物抗逆性。 面對我國大豆生產(chǎn)普遍存在嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)(鹽、旱、病蟲等)等關(guān)鍵問題，本研究將利用我國優(yōu)異的大豆種質(zhì)資源，發(fā)掘與抗逆相關(guān)的miRNA，鑒定miRNA調(diào)控靶基因的調(diào)節(jié)模式及所參與的信號通路。研

3、究這些miRNA對抗逆的影響，將構(gòu)建我國大豆抗逆miRNA研究的技術(shù)平臺，為大豆的遺傳改良、基因發(fā)掘提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐，填補(bǔ)大豆miRNA研究的空白。 本文通過檢索大豆miRNA數(shù)據(jù)庫，獲得通過生物信息學(xué)方法預(yù)測的大豆miRNA序列，通過克隆、測序的方法獲得了已預(yù)測的11條miRNA的成熟序列。 根據(jù)miRNA與mRNA互補(bǔ)的特性，以miRNA成熟序列為關(guān)鍵詞搜索miRNA的靶基因，通過10次測序驗(yàn)證了miRNA15