AtNHX1基因的分離與耐鹽性驗(yàn)證.pdf

1、鹽害是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的主要非生物脅迫因子之一，陸地表面具有豐富的鹽堿土和次生鹽堿土。利用大面積的鹽堿地資源發(fā)展農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，是人類迫切需要解決的問(wèn)題，培育耐鹽作物品種是生命科學(xué)研究熱點(diǎn)。甜土植物中缺乏主效耐鹽基因，人們寄希望于通過(guò)基因工程育種手段培育耐鹽作物品種。本研究利用RT-PCR的方法從擬南芥中克隆具有耐鹽主效基因特征的液泡膜Na+/H+逆向運(yùn)輸?shù)鞍谆?，?gòu)建AtNHX1基因的雙子葉植物表達(dá)載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將AtNHX1基因

2、導(dǎo)入模式植物煙草，驗(yàn)證AtNHX1基因的耐鹽功能，為培育黑龍江轉(zhuǎn)基因耐鹽水稻品種準(zhǔn)備基因資源。本研究主要結(jié)論如下： ⑴根據(jù)Gaxiola等(1999)發(fā)表的擬南芥AtNHX1基因(Gene Bank accession number AF106324)堿基序列設(shè)計(jì)PCR引物，以擬南芥cDNA為模板，通過(guò)PCR克隆方法，分離到了AtNHX1基因，并構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI121*—AtNHX1。 ⑵優(yōu)化了以煙草SR—1為受

3、體的農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源基因遺傳轉(zhuǎn)化體系—分化培養(yǎng)基組成MS+2.0mg/L6—BA+0.2mg/L NAA，葉片預(yù)培養(yǎng)2d，利用菌液濃度OD600值0.6的EHA105(pBI121*—AtNHX1)浸泡葉片8min，共培養(yǎng)2d，置于MS+2.0mg/L6—BA+0.2mg/L NAA+100mg/L kan+500mg/L cef的培養(yǎng)基上篩選抗性芽，抗性芽經(jīng)過(guò)生根培養(yǎng)基生根，移植到土壤。利用優(yōu)化的轉(zhuǎn)化體系將AtNHX1基因?qū)霟煵軸R—