HSP70基因轉染對燒傷后腸黏膜缺血缺氧性損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:通過體內(nèi)外實驗探討重組腺病毒介導的外源性HSP70基因轉染對嚴重燒傷后腸黏膜缺血缺氧性損傷的保護作用及其相關機制.通過該重組腺病毒載體微膠囊化效應的觀察,率先以口服轉染的新途徑探討其對嚴重燒傷大鼠腸黏膜缺血缺氧性損傷的保護作用,從而為進一步臨床應用奠定基礎.一、該實驗利用DNA-TPC方法成功制備含全長HSP70基因的復制缺陷型重組腺病毒載體(Ad-HSP70),并通過點突變修復、目的基因插入方向鑒定等方法的改進,提高了該腺病毒載

2、體制備效率.(時間縮短為1-2月),并通過應用腺病毒末端DNA-TPC重組方法,提高了腺病毒液滴度.(獲得的病毒液滴度為3.57×10<'10>pfu/ml,遠高于傳統(tǒng)方法1×10<'9>pfu/ml)二、通過Ad-HSP70體外轉染實驗證實重組腺病毒介導的HSP70基因過度表達對體外培養(yǎng)的腸上皮細胞缺血缺氧性損傷有保護作用,可保護腸上皮細胞活性,具體機制與減輕腸上皮細胞調(diào)亡與壞死率,維持腸上細胞增殖能力有關.三、重組腺病毒載體Ad-H

3、SP70經(jīng)微膠囊化后可體外存活擴增,躲避胃液損傷,并在人工腸液中35分后即可半數(shù)以上融出,可進行口服轉染.四、體內(nèi)實驗提示通過靜脈注射轉染與腹腔注射轉染Ad-HSP70可成功誘導目的基因高表達,減輕大鼠腸黏膜損傷指數(shù)、減少血清中細胞因子及內(nèi)毒素產(chǎn)生,從而可望減輕嚴重燒傷后全身性炎癥反應與多器官功能衰竭的發(fā)生.五、我們在實驗中率先應用微膠囊化Ad-HSP70腺病毒載體口服轉染大鼠,證實在腸道有確切吸收并在腸黏膜與心肌中檢測到目的基因的高表