馬鈴薯Y病毒CP基因片段DsRNA原核表達及其誘導抗性.pdf

1、轉錄后基因沉默是植物自身抵抗植物病毒侵染的一種保護機制，實踐證明通過轉基因在植物體內表達植物病毒的某個完整基因或者基因部分片段的雙鏈RNA(dsRNA)均能獲得高抗的轉基因植株。也有研究表明在植物體外表達或合成植物病毒某個完整基因的dsRNA，也能誘導植物提高自身對病毒的抗性。但在體外表達僅含有植物病毒部分基因片段的dsRNA，能否也能誘導植物的抗病性還未見報道。
　　 本研究以馬鈴薯Y病毒壞死株系CP基因為基礎，以L4440為

2、載體構建了兩個含有部分PVYN-CP基因片段的dsRNA原核表達載體，將其轉化大腸桿菌菌株HT115(DE3)，獲得了相應的轉化體，誘導表達產生了相關的dsRNA，并對產生的dsRNA進行了誘導抗病毒試驗，主要結果如下:
　　 1、RT-PCR獲得了PVYN-CP全長基因序列，并以此為基礎構建了含有PVYN-CP基因5'端264bp和中間253bp的反向重復兩個原核表達載體LL-LS-L4440和ML-MS-L4440;

3、　　 2、將其分別轉化大腸桿菌菌株HT115，獲得了相應的轉化體。含有ML-MS-L4440的轉化體經過IPTG誘導表達，獲得了相應的dsRNA，并通過在不同時間添加IPTG，確定了高產dsRNA的IPTG最佳誘導時期;通過比較不同的dsRNA提取方法，最終確定了LiCl沉淀法提取dsRNA比較理想。
　　 3、用表達dsRNA的滅活細菌液和dsRNA提純液及其100倍稀釋物處理煙草進行攻毒的試驗，結果證明表達dsRNA的滅活

4、細菌溶液和dsRNA提純液及其100倍稀釋物均能降低PVYN在煙草體內的含量，減輕PVYN對煙草的為害，表明含有PVYN-CP部分基因片段的體外表達的dsRNA能夠誘導植物對病毒產生抗病性。
　　 上述結果證實利用轉錄后基因沉默機制，構建含有部分植物病毒基因片段的原核表達載體，在特定的細菌菌株中誘導表達相應的dsRNA，用其滅活的細菌溶液和dsRNA提純液處理煙草，可誘導植物的病毒的抗性，這為誘導植物抗病毒的策略的制定奠定了基礎