馬鈴薯病毒快速檢測體系的建立及馬鈴薯BRP1基因dsRNA的體外表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、馬鈴薯病毒是造成馬鈴薯種質(zhì)退化的主要原因,可造成馬鈴薯產(chǎn)量降低和品質(zhì)下降。侵染馬鈴薯的植物病毒有40多種,其中PVY、PVS、PVM、PLRV等在田間生產(chǎn)中普遍發(fā)生,嚴(yán)重影響了馬鈴薯生產(chǎn)。目前,國內(nèi)外主要通過生產(chǎn)馬鈴薯脫毒種薯來解決種質(zhì)退化問題,這使馬鈴薯脫毒材料及種薯的病毒檢測顯得尤為重要,由此建立一套快速、有效的病毒檢測方法迫在眉睫;PSTVd很難通過莖尖脫毒去除,通過PSTVd結(jié)合蛋白探究其在寄主體內(nèi)的復(fù)制侵染是防控PSTVd的一

2、個新思路?;诖耍狙芯块_展了馬鈴薯主要病毒檢測方法和PSTVd結(jié)合蛋白相關(guān)基因的dsRNA研究,主要取得結(jié)果如下:
  1.克隆了青島地區(qū)ToCV和PVM的CP基因,其核苷酸序列全長分別為774bp、915bp。Blast比對結(jié)果顯示,ToCV青島分離物與各分離物間CP基因序列的相似性為97.2%-99.6%,推導(dǎo)的氨基酸序列的相似性為97.3%-100%;PVM青島分離物與各分離物間CP基因序列的相似性為79.0%-95.5%

3、,推導(dǎo)的氨基酸序列相似性為84.5%-97.7%。
  2.以感染PSTVd的植株總RNA作為模板,比較了一步RT-PCR方法與兩步RT-PCR方法,表明一步RT-PCR檢測技術(shù)具有快捷、簡便、減少污染等優(yōu)點。以此為基礎(chǔ),建立了馬鈴薯5種主要病毒(PVS、PLRV、PVY、PVM和ToCV)和1種類病毒(PSTVd)同時檢測鑒定的一步六重RT-PCR技術(shù),擴增得到目的條帶大小分別為932bp、781bp、628bp、534bp、2

4、29bp和359bp。
  3.克隆了PSTVd的馬鈴薯結(jié)合蛋白BRP1蛋白基因,ORF全長1809bp,含有191bp內(nèi)含子,推導(dǎo)的氨基酸序列全長為602aa。其與番茄同源蛋白Virp1的氨基酸序列相似性在98%以上,其中核定位信號區(qū)域為100%、bromodomain結(jié)構(gòu)域為97%、RNA結(jié)合區(qū)域為93%;構(gòu)建了針對BRP1蛋白基因的1217bp BRP11的dsRNA原核表達載體和548bp BRP12的dsRNA體外轉(zhuǎn)錄體

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