簇毛麥重復(fù)序列的分離及抗性相關(guān)的分子標(biāo)記研究.pdf

1、為建立簇毛麥(Dasypyrum)特定染色體上的特異性ISSR標(biāo)記，以二倍體簇毛麥(Dasypyrum Villosum)、小麥中國(guó)春(Chinese Spring)等為材料，對(duì)96條ISSR引物進(jìn)行PCR篩選，發(fā)現(xiàn)引物UBC848可在二倍體簇毛麥中擴(kuò)出一條長(zhǎng)388bp的特異性片段，命名為pDv848/388(Genbank登錄號(hào)：EF411201)，而中國(guó)春等小麥均未擴(kuò)出該片段。利用UBC848對(duì)小麥近緣種偏凸山羊草(Aegilops

2、ventricosa)、荊州黑麥(Secale cerealecv．Jingzhou rye)和節(jié)節(jié)麥(Aegilopstauschii)等進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)它們均未擴(kuò)出pDv848/388。進(jìn)而用一套中國(guó)春一二倍體簇毛麥附加系CSDA1V～CSDA7V對(duì)pDv848/388進(jìn)行染色體定位，將目標(biāo)片段確定在二倍體簇毛麥5V染色體上。進(jìn)一步用UBC848對(duì)多年生簇毛麥(Dasypyrumbreviaristatum)、小麥一簇毛麥雙二倍體、部

3、分雙二倍體及其衍生后代進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)它們均能擴(kuò)出pDv848/388，這表明pDv848/388可作為簇毛麥5V染色體上的一個(gè)特異性ISSR標(biāo)記，用于快速跟蹤檢測(cè)簇毛麥遺傳物質(zhì)向栽培小麥中的導(dǎo)入。 根據(jù)植物抗病基因保守結(jié)構(gòu)域NBS(Nucleotide—binding site，核苷酸結(jié)合位點(diǎn))、LRR(Leucine—rich repeats，富含亮氨酸重復(fù))設(shè)計(jì)13條引物相互組合對(duì)多年生簇毛麥基因組總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲

4、得了小麥抗條銹病基因Yr10的全長(zhǎng)同源序列DbRGAYr10，其序列全長(zhǎng)為5615bp，編碼的氨基酸組成與其他已知的普通小麥(Triticum aestivum)、節(jié)節(jié)麥(Aegilops tauschii)、水稻(Oryza sativa)、大麥(Hordeum vulgare)、高粱(Sorghum bicolot)、一粒小麥(triticummonococcum)基因組內(nèi)Yr10基因或抗性類似基因編碼的氨基酸序列具有89-90％的