簇毛麥染色體分子標記的篩選及其高分子量谷蛋白亞基基因的克隆.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文簇毛麥染色體分子標記的篩選及其高分子量谷蛋白亞基基因的克隆姓名：劉守斌申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：劉廣田2002.6.1分別為110bp和190bp的片段(即Xg珊498／110和xg哪498／190)，這兩個片段僅在簇毛麥、中國春一簇毛麥1Ha附加系中出現(xiàn)，其余2Ha、4Ha、5Ha、6Ha、7Ha附加系、3V代換系和中國春中都缺少這兩個片段。迸一步研究表明，這兩個片段與簇毛麥的居群無關(guān)。因此

2、，xg釉498／“O和x踟n498／190為簇毛麥lV染色體所特有，可以用來快速跟蹤導(dǎo)入普通小麥背景中的簇毛麥的lV染色體。4利用SDS—PAGE技術(shù)，對中國春、錢尼、簇毛麥、6個中國春一簇毛麥二體附加系、普通小麥～簇毛麥3V異代換系、進行哪谷蛋白的亞基組成分析，進一步確定簇毛麥Ⅲ1】『谷蛋白編碼基因位于1v染色體。f根據(jù)已發(fā)表的普通小麥刪1】『谷蛋白亞基編碼基因的核苷酸序列進行同源性比較的結(jié)果，設(shè)計了3對分別擴增普通小麥x一型亞基基因

3、、y一型亞基基因以及所有nflv—GS基因的特異引物。經(jīng)過對簇毛麥蹦w_Gs編碼基因進行擴增，發(fā)現(xiàn)三對引物都能鑒別簇毛麥刪w—Gs編碼基因，并從分子水平上把簇毛麥mlW～GS編碼基因定位于簇毛麥1V染色體上。I5從三個不同來源的簇毛麥中克隆了lVa、lVb、1Vc等三個簇毛麥高分子量谷蛋白亞基編碼基因。【經(jīng)過全序列測定和同源性比較，發(fā)現(xiàn)它們與普通小麥部分已知y一型亞基在N一端的一致性明顯高于部分已知x一亞基的N一端一致性，但c～端序列的

4、比較結(jié)果卻又顯示它們與部分已知x型皿基的一致性明顯高于y一型亞基。卜端共有105個氨基酸，其中包括5個半胱氨酸殘基。在重復(fù)區(qū)沒有發(fā)現(xiàn)x型亞基所特有的三肽(GQQ)類型。1vc因在編碼區(qū)出現(xiàn)了兩個終止予而可能為一個假基因。將1Va、1Vb、lVc編碼的亞基和普通小麥高分子量谷蛋白亞基的N一端和C一端序列進行聚類分析表明，1Va、lVb和lVcN一端與y一型高分子量谷蛋白亞基的N一端聚類在一起，而C一端卻與x一型高分子量谷蛋白亞基的c一端聚

5、類在一起。但無論在N一端和C一端，簇毛麥V基因組編碼的亞基與A、B、D和R基因組編碼的亞基都不在同一支。說明簇毛麥V基因組與A、B、D和R基因組親緣關(guān)系相對較遠，可能V組染色體在A、B、D和R基因組分化之前就已經(jīng)存在。丈6根據(jù)所克隆的三個簇毛麥H刪_Gs基因的核苷酸序列和已發(fā)表的普通小麥HMl】|r—Gs基因的核苷酸序列，經(jīng)過同源性比較后設(shè)計了兩對簇毛麥HMw～Gs編碼基因的特異性引物。悃這兩對引物分別對六個不同來源簇毛麥進行PcR擴增