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文檔簡(jiǎn)介
1、本文綜合利用Bac-to-Bac和ET-Recombination的策略,通過(guò)基因敲除等方法研究vlf-1基因在桿狀病毒感染周期中的生物學(xué)功能?! ”疚耐ㄟ^(guò)PCR方法擴(kuò)增vlf-1基因的上下游序列,再經(jīng)過(guò)克隆將抗性基因連入vlf-1基因的上下游序列之間構(gòu)成敲除vlf-1基因的線形DNA同源片段。將此線形DNA同源片段電轉(zhuǎn)入含AcBacmid的E.coli菌株,通過(guò)ET-Recombination技術(shù)發(fā)生同源重組,最后在含Zeocin的
2、低鹽LB平板上篩選vlf-1缺失Zeocin插入的重組BacmidpAcKO。提取pAcKODNA,將其轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,以研究vlf-1的缺失對(duì)AcMNPV復(fù)制的影響。 本文用S1MNPVvlf-1拯救AcMNPVvlf-1已敲除的vAcKO-GP的重組病毒的功能,檢驗(yàn)兩者是否能作功能替換。桿狀病毒復(fù)制的調(diào)控依賴于其獨(dú)特的順式作用元件hrs和非hr的DNA片段與6個(gè)復(fù)制必需基因和3個(gè)促進(jìn)復(fù)制的非必需基因即反式作用因子間的相互作用。
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