大黃魚凝集素galectin-9和Nattectin-like的功能研究.pdf

1、凝集素是可以特異性結合糖類的模式識別受體，在先天性免疫中發(fā)揮著重要作用。本研究從已構建的大黃魚（Larimichthys crocea）轉錄組數據庫中篩選出兩種凝集素基因， galectin-9和Nattectin-like新型C-型凝集素，分別命名為LcGal-9和LcNTC，并對它們的免疫功能進行了研究，得到的結果如下：
　　LcGal-9是一種半乳糖凝集素，其cDNA全長1496 bp，開放閱讀框（ORF）978 bp，編碼

2、325個氨基酸。LcGal-9不具有信號肽和跨膜區(qū)，含有兩個由短肽相連的CRD結構域，每個CRD均含有兩個保守的糖結合位點H-NPR和WG-EE-。系統(tǒng)進化分析發(fā)現，LcGal-9與雀鯛（Stegastes partitus）等魚類的galectin-9聚為一支。qRT-PCR分析表明，LcGal-9 mRNA廣泛分布于大黃魚的各種組織，其中在肝臟中的表達量最高。Western blot結果顯示，肝臟、脾臟、腸道等組織中LcGal-9蛋

3、白的含量豐富，而在肌肉和血漿中沒有檢測到LcGal-9蛋白。PolyI:C刺激后，肝臟、脾臟和頭腎中的LcGal-9 mRNA在多個時相均顯著上調；相反， LPS和副溶血弧菌刺激后，LcGal-9在三種組織中的表達量普遍下調。刺激隱核蟲感染后，鰓、皮膚、脾臟和頭腎中的 LcGal-9在感染初期均明顯升高。體外重組表達的 LcGal-9（rLcGal-9）具有不依賴 Ca2+的生物學活性，不僅可以凝集人、家兔和大黃魚的紅細胞，對革蘭氏陰性

4、菌溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌也具有凝集作用。α-乳糖和LPS能抑制rLcGal-9的凝血活性。免疫組化結果表明，PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，脾臟中LcGal-9蛋白量增加。以上結果為研究LcGal-9在大黃魚先天免疫應答中作用提供了依據。
　　LcNTC屬于C-型凝集素家族，其cDNA全長859 bp，開放閱讀框（ORF）465 bp，編碼154個氨基酸。LcNTC的N端有一個信號肽和一個跨膜區(qū)，C端含有一個CRD結構域，其中含

5、有甘露糖結合位點 EPN和四個可形成二硫鍵的保守半胱氨酸。系統(tǒng)分析表明， LcNTC與魚類C-型凝集素和多種Nattectin-like蛋白具有較近的親緣關系。LcNTC mRNA在大黃魚各組織中均有表達，其中鰓中的表達量最高。LPS、PolyI:C和副溶血弧菌刺激后，肝臟、脾臟和頭腎中 LcNTC的表達量在不同時相顯著升高。刺激隱核蟲感染后，鰓、皮膚、脾臟和頭腎中LcNTC也呈現出不同程度的上調。體外重組表達的LcNTC（rLcNTC