蘆筍花藥培養(yǎng)技術(shù)研究.pdf

1、我國(guó)是世界上蘆筍第一生產(chǎn)和出口大國(guó)，種苗需求量大。目前國(guó)內(nèi)蘆筍生產(chǎn)用種依賴于進(jìn)口品種。蘆筍育種常采用“全雄育種法”，而育成具有MM基因型的超雄株是全雄育種的關(guān)鍵。利用蘆筍雄性雌雄株自交或兄妹交培育超雄株，繁殖系數(shù)低且育出優(yōu)良超雄株機(jī)率小，而利用花藥培養(yǎng)獲得來自花粉的超雄株，可以顯著提高全雄育種效率。
　　 本研究以5個(gè)蘆筍優(yōu)良品種花藥為試驗(yàn)材料，探討不同因素對(duì)花藥愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響，獲得大量的再生植株；利用植物莖尖染色體數(shù)

2、目檢測(cè)方法檢測(cè)再生植株染色體倍性；比較兩種不同的秋水仙素處理方法對(duì)單倍體的加倍效果，獲得加倍后的雙單倍體(DH)；研究NAA、IAA、IBA和S-3307等4種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)試管苗生根的影響，培育出生根試管苗并進(jìn)行了移栽；利用溴麝香草酚藍(lán)(BTB)法鑒別蘆筍花培苗雌雄性，篩選出超雄株。本研究建立起一個(gè)簡(jiǎn)便而高效的蘆筍超雄株培育體系。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．花藥愈傷組織誘導(dǎo)。比較花藥生理狀態(tài)、基因型、低溫預(yù)處理、離心處理、

3、高溫?zé)峒?、培養(yǎng)基附加物和光照強(qiáng)度等7個(gè)因素對(duì)蘆筍花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，4月份采集的花藥愈傷組織誘導(dǎo)率高，不同基因型的花藥愈傷組織誘導(dǎo)率不同，低溫預(yù)處理、高溫?zé)峒?、培養(yǎng)基附加水解酪蛋白和光照培養(yǎng)有利于花藥愈傷組織的形成，而離心處理未能提高花藥愈傷組織誘導(dǎo)率。
　　 2．花藥愈傷組織植株再生。分析不同類型、不同日齡、不同品種的愈傷組織和培養(yǎng)方式對(duì)植株再生的影響。結(jié)果表明，致密型愈傷組織分化率高且分化苗正常，松散型愈傷組織

4、分化率低且分化苗多為玻璃化苗；不同日齡的愈傷組織綠芽分化能力不同，以30～40d的最高；不同品種花藥培養(yǎng)的愈傷組織分化率不同；二次培養(yǎng)有效地促進(jìn)了綠芽的分化和生長(zhǎng)。
　　 3．單倍體鑒定。利用植物莖尖壓片染色體計(jì)數(shù)法對(duì)蘆筍花藥培養(yǎng)再生植株進(jìn)行染色體的倍性鑒定。結(jié)果表明，蘆筍花藥培養(yǎng)再生植株群體中染色體變化范圍大，有單倍體、二倍體、四倍體和非整倍體等；不同類型愈傷組織單倍體分化率不同，致密型愈傷組織單倍體分化率(28.4％)大大高

5、于松散型愈傷組織(5.7％)；本試驗(yàn)從5個(gè)試驗(yàn)品種的再生植株群體中檢測(cè)到4個(gè)品種36個(gè)單倍體株系。
　　 4．單倍體染色體加倍。通過不同的試驗(yàn)材料處理方法，研究秋水仙素對(duì)蘆筍單倍體植株的染色體加倍效果。結(jié)果表明，秋水仙素處理蘆筍單倍體試管苗可以獲得雙單倍體(DH)和多倍體；培養(yǎng)基法加倍效果優(yōu)于浸泡法，以秋水仙素濃度0.05mg.L-1培養(yǎng)15d或0.1mg.L-1培養(yǎng)10d為佳，其誘導(dǎo)成功率分別為53.04％和52.98％，加倍

6、后的莖尖經(jīng)過四代培養(yǎng)，能夠得到穩(wěn)定的DH植株。本試驗(yàn)得到4個(gè)品種10個(gè)DH株系。
　　 5．試管苗生根。探討NAA、IAA、IBA和S-3307等4種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑不同配方對(duì)試管苗生根的影響。結(jié)果表明，配合使用三種生長(zhǎng)素，可以增加生根株根數(shù)，減少畸形根的發(fā)生，提高有效生根率；不同品種生根能力存在著差異；適宜濃度的S-3307有促進(jìn)蘆筍難生根品種試管苗生根的功能；較佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+KT0.1mg.L-1+NAA0.1mg

7、.L-1+IAA0.5mg.L-1+IBA2.0mg.L-1+S-33070.1mg.L-1。
　　 6．花培苗雌雄性別早期鑒別。應(yīng)用溴麝香草酚藍(lán)(BTB)法鑒別蘆筍花培苗幼苗階段的雌雄性別。結(jié)果表明，BTB法可以用來鑒別蘆筍幼齡植株的雌雄性別；蘆筍花培苗幼苗階段雌株提取液變色明顯快于雄株，提取液變色時(shí)間在提取后約6h左右，吸收光譜表明雌株提取液此時(shí)在620nm處已沒有高峰，呈平坦?fàn)?，而雄株提取液在此時(shí)仍呈高峰，二者差異明顯。本