馬鈴薯花藥培養(yǎng)及雙單倍體植株的鑒定.pdf

1、以馬鈴薯的34個基因型為試驗(yàn)材料，進(jìn)行花藥培養(yǎng)。分析了馬鈴薯基因型、激素種類對花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)和愈傷組織分化的影響；以訥16、克新13、VA、中薯5號、西北果、魯引1號、克19為試驗(yàn)材料，研究花粉發(fā)育時期、不同預(yù)處理、蔗糖濃度對馬鈴薯花藥愈傷組織誘導(dǎo)率的影響；以訥16、克新13、VA、內(nèi)薯7號和魯引1號為試驗(yàn)材料，研究培養(yǎng)基附加物硝酸銀、活性炭、馬鈴薯提取液等因素對馬鈴薯花藥愈傷組織誘導(dǎo)率及褐化率的影響；以訥16、克13和內(nèi)薯7號的愈傷組織

2、為試驗(yàn)材料，對4種培養(yǎng)基和3個基因型進(jìn)行聯(lián)合方差分析；對馬鈴薯花藥培養(yǎng)獲得的再生植株進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)觀察，獲得的雙單倍體植株進(jìn)行移栽和微型薯的播種，并進(jìn)行雜交農(nóng)藝性狀鑒定。
　　 試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1.馬鈴薯花蕾的大小和顏色基本可以作為判斷小孢子發(fā)育時期的一個簡便而可靠的指標(biāo)，小孢子處于單核靠邊期時，花蕾大小5.0～6.0mm左右，顏色為淺綠色。
　　 2.在相同的培養(yǎng)條件下，不同基因型進(jìn)行花藥培養(yǎng)，基因型表現(xiàn)的

3、愈傷誘導(dǎo)率差異明顯。其中訥16的愈傷組織的誘導(dǎo)率高是8.1％，呼H9601-29的愈傷組織誘導(dǎo)率為0.2％。
　　 3.植物激素的濃度和配比對花藥培養(yǎng)起決定性的作用。本試驗(yàn)以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的NAA、2，4-D、KT配比，結(jié)果顯示：MS+NAA0.5mg/L+2，4-D0.5 mg/L+KT0.5mg/L適合愈傷組織的誘導(dǎo)。
　　 4.馬鈴薯花藥培養(yǎng)的低溫預(yù)處理、甘露醇預(yù)處理和熱激處理均能明顯地提高馬鈴薯愈

4、傷組織的誘導(dǎo)率；甘露醇預(yù)處理還能明顯降低褐化率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：馬鈴薯花藥先在4℃條件下處理2d，再用甘露醇預(yù)處理2d。然后接種，接種后33℃高溫處理，處理24h效果最佳。甘露醇濃度40g/L效果為宜。
　　 5.培養(yǎng)基中加入硝酸銀、活性炭和馬鈴薯提取液能提高愈傷組織的誘導(dǎo)率；另外加入硝酸銀、活性炭可以降低褐化率。20mg／L硝酸銀、0.5g/L活性炭和50g/L的馬鈴薯提取液，效果最佳。
　　 6.蔗糖作為糖源時，濃度為

5、6％時馬鈴薯愈傷組織的誘導(dǎo)率高。當(dāng)蔗糖和麥芽糖作為糖源，濃度均為6％時，麥芽糖對愈傷組織的誘導(dǎo)率高于蔗糖。
　　 7.用訥16、克13和內(nèi)薯7號的愈傷組織為試驗(yàn)材料，對4種培養(yǎng)基和3個基因型進(jìn)行聯(lián)合方差分析，并用新復(fù)極差法對培養(yǎng)基和基因型組內(nèi)進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示：品種間>培養(yǎng)基間>品種x培養(yǎng)基，表明品種間的差異顯著性高于培養(yǎng)基和品種x培養(yǎng)基，培養(yǎng)基間的差異顯著性高于品種x培養(yǎng)基。培養(yǎng)基間和品種之間的差異性極顯著。