黃瓜果柄中2種堿性α-半乳糖苷酶mRNA的原位定位.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、黃瓜(Cucumis sativus L.)以水蘇糖作為體內(nèi)同化物的主要運輸形式，但在果實中只含有蔗糖、葡萄糖和果糖等可溶性糖。α-半乳糖苷酶( alpha-galactosidase，EC3.2.1.22)是催化黃瓜體內(nèi)水蘇糖生物分解的關(guān)鍵酶。研究α-半乳糖苷酶在果柄細胞空間表達可為闡明黃瓜體內(nèi)水蘇糖的卸出機理提供重要線索。為此，本試驗采用地高辛標記的RNA探針，通過原位雜交方法研究了兩種堿性α-半乳糖苷酶mRNA在果柄處的分布。

2、 石蠟切片觀察結(jié)果表明黃瓜果柄內(nèi)存在雙韌維管束結(jié)構(gòu)，10μm厚度的切片適合用于原位雜交研究。 根據(jù)兩種黃瓜堿性α-半乳糖苷酶cDNA序列，在非同源區(qū)段設(shè)計各自的特異引物，運用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)擴增相應(yīng)片段，連接入含RNA聚合酶啟動子的質(zhì)粒pGEM-TE中，構(gòu)建探針合成載體。進一步采用體外轉(zhuǎn)錄法合成地高辛標記的RNA探針，并利用點雜交檢測其標記效率及雜交效率。結(jié)果表明：在探針濃度稀釋至0.03pg/μL時

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