黃瓜(cucumissativusl.)α半乳糖苷酶基因啟動子的克隆及序列分析

1、揚州大學碩士學位論文黃瓜（Cucumis sativus L.）α-半乳糖苷酶基因啟動子的克隆及序列分析姓名：王奎山申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：繆旻珉201005012 揚州大學碩士學位論文A b s t r a c ta - g a l a c t o s i d a s e s e x i s t w i d e l yi nh i g h e rp l a n t sa n dh a si m p o r t a n

2、tp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n s ．P r e s e n t l y , t h er e s e a r c ho n t h ep l a n t0 【一g a l a c t o s i d a s e si sl a g g i n gb e h i n dw h e nc o m p a r i n gw i t l ls u c r o s e - m e t a b

3、o l i z i n ge n z y m e s ．C l o n i n gp r o m o t e rs e q u e n c e so ft h e s eg e n e s w o u l d p r o v i d e i m p o r t a n t c l u e s a n d n e w t o o l s f o r f u r t h e r s t u d y o f t h e i rp h y s

4、i o l o g i c a lf u n c t i o n s ．F i r s t l y , p a r t i a l g e n o m i c f r a g m e n t s o f3 a - g a l a c t o s i d a s e g e n e s w e r e o b t a i n e da c c o r d i n g t ot h e i r e D N A s e q u e n c e

5、 sb y P C ＆a n d t h e n s o m e t a r g e t —s p e c i f i cp r i m e r s W e r ed e s i g n e d b a s e d o n t h e s eg e n o m i c s e q u e n c e sf o rD N A w a l k i n g ．F i n a l l y , p r o m o t e r r e g i o

6、ns e q u e n c e so f3 g e n e sw e r ec o l o n e du s i n gD N A W a l k i n gS p e e d U p T MP r e m i xK i ta n dT a K a R aG e n o m eW a l k i n gK i t ( 1 8 5 5b pb e f o r et r a n s c r i p t i o n a l s t a r

7、t s i t e o fa l k a l i n ea - g a l a c t o s i d a s eI ，19 0 2b p b e f o r e t r a n s c r i p t i o n a ls t a r ts i t eo f a l k a l i n ea - g a l a c t o s i d a s e I Ia n d1 4 2 0b pb e f o r et r a n s c r i

8、 p t i o n a ls t a r ts i t eo f a c i da - g a l a c t o s i d a s eI I ) ．I na d d i t i o n ，t h e r ei s a 16 13b pi n t r o ni n a l k a l i n e a —g a l a c t o s i d a s e I I 5 ’u n t r a n s l a t e dr e g i o

9、n , w h i c hm a y b e w i Ⅱlp o t e n t i a lp r o m o t e rr e g u l a t i n g f u n c t i o n ．S e q u e n c e a n a l y s i s w i t h P L A C Es o f t w a r e s h o w e d t h a t b e s i d e s b a s i c p r o m o t e

10、 re l e m e n t s s u c h a s C A A T - B o x ，飛蛆k B o x ，t h ep r o m o t e r r e g i o n s e q u e n c e s o f 3c u c u m b e r a ·g a l a c t o s i d a s eg e n e sc o n t a i ns o m ei m p o r t a n tc i s —e l

11、e m e n t sw h i c h h a v eb e e nr e p o r t e d ，s u c ha s ：e n d o s p e r m —s p e c i f i c e x p r e s s i o n r e g u l a t o r ye l e m e n t s ( A A C A C O R E O SG L U B 1 ) r e l a t e d t o s e e d m a t u

12、 r a t i o n a n d g e r m i n a t i o n ；d e h y d r a t i o n s t r e s s a n d d a r kr e s p o n s ee l e m e n t ( A C G T A T E R D 1 ) r e l a t e dt o l e a fs e n e s c e n c e ；c o l di n d u c e dr e s p o n s

13、 ee l e m e n t ( M Y C C O N S E N S U S A T ) r e l a t e d t op l a n tf r e e z i n gr e s i s t a n c e ；e t h y l e n e —i n d u c e dr e s p o n s ee l e m e n t ( E R E L E E 4 ) r e l a t e d t of i ' u i tr

14、 i p e n i n g ，a n dp a t h o g e n —i n d u c e dr e s p o n s ee l e m e n t ( O S E 2 R O O T N O D U L E ) r e l a t e d t op l a n t sd e f e n s e r e s p o n s ea f t e ri n f e c t i o n b yt h e d i s e a s e ．

15、T h ee x i s t e n c eo f t h e s ee l e m e n t sf u r t h e ri n d i c a t e st h a ta ．g a l a c t o s i d a s e sm a yp l a yw i d ea n di m p o r t a n t r o l e si nc u c u r b i t s ．I nc o n c l u s i o n , t h e

16、c l o n i n go f t h ep r o m o t e rr e g i o no f3c u c u m b e r a 。g a l a c t o s i d a s eg e n e sw i l lf a c i l i t a t et h ef u n c t i o n a lg e n o m i cs t u d yo f t h e s eg e n e s ，s u c h a s t h eu