利用微陣列技術(shù)篩選大白豬和二花臉豬經(jīng)產(chǎn)母豬排卵卵泡差異表達(dá)基因.pdf

1、繁殖性狀是非常重要的經(jīng)濟(jì)性狀，產(chǎn)仔性能的高低直接影響?zhàn)B豬業(yè)的生產(chǎn)效益。本試驗(yàn)選用繁殖力強(qiáng)的中國地方豬種代表二花臉豬和繁殖性能較差的國外豬種代表大白豬作為試驗(yàn)動(dòng)物，采用基因芯片技術(shù)，探討了經(jīng)產(chǎn)二花臉豬和大白豬之間成熟卵泡基因表達(dá)量的變化。根據(jù)表達(dá)狀況和生理生化功能，選取BAX基因作為影響豬繁殖性能的候選基因。采用RT-PCR的方法進(jìn)行部分差異表達(dá)基因的組織表達(dá)研究；利用直接測序的方法對(duì)所分離片段進(jìn)行SNP檢測；以大白豬(273頭，383窩

2、)、中國瘦肉豬新品系DIV(128頭，220窩)為試驗(yàn)材料，進(jìn)行多態(tài)性與豬繁殖性能的相關(guān)性分析。結(jié)果有如下幾個(gè)方面：
　　 1.應(yīng)用含23937條探針的Affymetrix豬全基因組寡聚核苷酸芯片檢測3頭大白豬和3頭二花臉豬成熟卵泡的差異表達(dá)基因。通過T檢驗(yàn)，篩選出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)的相關(guān)基因(P＜0.05)。結(jié)合fold倍數(shù)2倍以上的標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的基因共有133個(gè)，其中，在二花臉豬種中表達(dá)上調(diào)的基因29個(gè)，包括BMP

3、R1B，H3F3A,MT-2B，ELA2等基因；表達(dá)下調(diào)的基因有104個(gè)，包括GALP,KIT,BAX,P53等基因。
　　 2.本試驗(yàn)選取了8個(gè)基因作為待驗(yàn)證基因，分別為：P53,BMPR1B,ITM2A，wIT1,H3F3A，LOC396850,CNN2,GALP。用實(shí)時(shí)定量PCR(real-timePCR)的方法驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的可靠性，結(jié)果證明7個(gè)基因(除CNN2基因外)的mRNA在芯片結(jié)果中和實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果中的表達(dá)

4、趨勢是一致的，兩種結(jié)果的相關(guān)性顯著，說明基因芯片的結(jié)果是可靠的。
　　 3.BAX基因：(1)獲得豬BAX基因第一內(nèi)含子416bp的cDNA序列。(2)對(duì)所獲得的序列進(jìn)行SNP檢測，應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)，建立了豬BAX基因于119bp處的EarⅠ酶切分型技術(shù)。(3)分析結(jié)果表明：EarⅠ多態(tài)位點(diǎn)與農(nóng)科院大白豬的頭胎總產(chǎn)仔數(shù)(TNB)、產(chǎn)活仔數(shù)(NBA)(P＜0.05,P＜0.01)顯著相關(guān)，基因加性效應(yīng)差異顯著(P＜0.05