果汁飲料中防腐劑苯甲酸含量的分析研究【畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　果汁飲料中防腐劑苯甲酸含量的分析研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 化學(xué)工程

2、與工藝 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘 要: 雖著社會(huì)的日益發(fā)展，果汁飲料已經(jīng)成為人們?nèi)?/p>

3、常生活中不可缺少的生活必需品了，現(xiàn)在，果汁飲料的種類也越來(lái)越多，人們對(duì)果汁飲料的要求也越來(lái)越高了。果汁飲料是以水果為原料經(jīng)過(guò)物理方法如壓榨、離心、萃取等得到的汁液產(chǎn)品，一般是指純果汁或100％果汁。果汁按形態(tài)分為澄清果汁和混濁果汁。但眾所周知，絕大多數(shù)的飲料都是要添加防腐劑的。防腐劑是指天然或合成的化學(xué)成分，用于加入食品、藥品、顏料、生物標(biāo)本等，以延遲微生物生長(zhǎng)或化學(xué)變化引起的腐敗。隨著人們愈來(lái)愈重視食品的健康安全，對(duì)果汁飲料中防腐劑的

4、安全性研究也越來(lái)越多，本文主要是對(duì)果汁飲料中防腐劑苯甲酸含量進(jìn)行的分析研究。</p><p>　　關(guān)鍵詞：食品添加劑，高效液相色譜法, 苯甲酸 Juice of analyzing the content of preservative benzoic acid</p><p>　　Abstract : Although the development of t

5、he society, juice drinks have become indispensable people daily life the necessities, now, juice species more and more, people to juice requirements are increasingly high. Juice drink was fruit as raw material after phys

6、ical methods such as crushing, centrifugal, extract the juice etc. Get product, generally refers to pure fruit juice or 100% juice. Juice according to form into clear juice and cloudy juice. But it is well known that the

7、 vast majority of dr</p><p>　　Keywords: Food additives, High performance liquid chromatographic method, Benzoic acid </p><p><b>　　目錄</b></p><p>　　摘要…………………………………………

8、…………………………………………………………..…錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　Abstract:……………………………………………………………………………………………………錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　一 緒論…………………………………………………………………………………………………..1</p><p>　　1.1引言錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。

9、</p><p>　　1.2 防腐劑的發(fā)展現(xiàn)狀1</p><p>　　1.3 防腐劑的來(lái)源及危害2</p><p>　　1.3.1 防腐劑的來(lái)源錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　1.3.2 防腐劑的危害錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　1.4 防腐劑苯甲酸的處理4</p>&

10、lt;p>　　1.4.1 防腐劑苯甲酸含量測(cè)定方法的發(fā)展4</p><p>　　1.4.2 高效液相色譜法測(cè)定果凍中苯甲酸錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　1.4.3 高效液相色譜法測(cè)定含乳飲料中苯甲酸5</p><p>　　1.4.4 高效液相色譜法測(cè)定腌熏臘肉中苯甲酸、山梨酸及前處理方法比較….5</p><p&g

11、t;　　1.4.5 HPLC法測(cè)定飲料中苯甲酸含量的不確定度評(píng)定…………………………………… 5</p><p>　　二 實(shí)驗(yàn)部分……………………………………………………………………………………………..6</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備6</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑6</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀

12、器6</p><p>　　2.2 色譜參考條件7</p><p>　　2.3 實(shí)驗(yàn)步驟7</p><p>　　三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 ………………………………………………………………………………8</p><p>　　3.1 色譜條件8</p><p>　　3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 9</p>

13、;<p>　　3.2.1 樣品中苯甲酸含量估算9</p><p>　　3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制9</p><p>　　3.4.3 回收率實(shí)驗(yàn)10</p><p>　　3.1.4 方法的精密度11</p><p><b>　　四 結(jié)論11</b></p><p>　

14、　參考文獻(xiàn)…………………………………………………………………………………………………12</p><p>　　致 謝…………………………………………………………………………………………………….13</p><p><b>　　一 緒論</b></p><p><b>　　1.1 概述</b></p>

15、<p>　　防腐劑是一種能夠抑制食品中微生物生長(zhǎng)和繁殖的化學(xué)物質(zhì)。如果按照國(guó)家規(guī)定的數(shù)量使用，不僅可以防止食品生霉，而且可以防止食品變質(zhì)或腐敗，并能延長(zhǎng)保存時(shí)間，同時(shí)對(duì)食用者也不會(huì)引起什么危害。因此，對(duì)防腐劑的使用必須控制一定的使用量，而且應(yīng)具備以下特點(diǎn)：</p><p>　?、?凡加入食品中的防腐劑，首先是對(duì)人體無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)副作用的；</p><p>　?、?長(zhǎng)期使用添加防腐

16、劑的食品，不應(yīng)該使機(jī)體組織產(chǎn)生任何的病變，更不能影響第二代發(fā)育、生長(zhǎng)；</p><p>　?、?加入防腐劑之后，對(duì)食品的質(zhì)量不能有任何的影響和分解；</p><p>　?、?食品加入防腐劑之后，不能掩蔽劣質(zhì)食品的質(zhì)量或改變?nèi)魏胃泄傩誀睢?lt;/p><p>　　我國(guó)允許使用的防腐劑有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對(duì)羥基苯甲酸乙酯及丙酯等。其中前兩種應(yīng)用廣泛。</

17、p><p>　　苯甲酸及其鹽類使用范圍：醬油、醋、果汁類、果醬類、葡萄糖、罐頭，最大使用劑量1g/公斤；汽酒、汽水、低鹽醬菜、面醬類、蜜餞類、山楂糕、果味露，每公斤最多使用0.5g。</p><p>　　苯甲酸隨食品進(jìn)入體內(nèi)時(shí)與甘氨酸結(jié)合成馬尿酸，從尿液中排出體外，不再刺激腎臟；山梨酸進(jìn)入機(jī)體后參與新陳代謝，最后生成CO2和H2O，被排出體外，由于山梨酸及其鹽類價(jià)格貴一般不常用，多數(shù)用在出口食

18、品中。</p><p>　　苯甲酸又名安息香酸，為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)122℃，沸點(diǎn)249.2℃，100℃開(kāi)始升華。在酸性條件下可隨水蒸汽蒸餾，微溶于水，易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑，化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定。</p><p>　　1.2 防腐劑的發(fā)展現(xiàn)狀</p><p>　　目前，防腐劑在食品的使用最為廣泛，它能有效防止食品由微生物所引起的腐敗變質(zhì)現(xiàn)

19、象的發(fā)生，從而延長(zhǎng)其保存期?？梢哉f(shuō)，沒(méi)有食品防腐劑就不可能有現(xiàn)代食品工業(yè)。</p><p>　　隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們逐步發(fā)現(xiàn)化學(xué)合成食品防腐劑存在對(duì)人體健康的巨大威脅。于是，世界各國(guó)都又致力于廣譜、安全、高效食品防腐劑的研發(fā)。近年來(lái)，隨著人們生活和消費(fèi)水平的提高，人們對(duì)食品的安全水平提出了更高的要求，食品加工企業(yè)為了順應(yīng)市場(chǎng)的變化，其產(chǎn)品也越來(lái)越向“綠色”和“天然”等方向轉(zhuǎn)變，因此，天然、安全的功能性食品防腐

20、劑的研究開(kāi)發(fā)就成為必要。</p><p>　　1.3 防腐劑的來(lái)源及危害</p><p><b>　　防腐劑的來(lái)源</b></p><p>　　食品防腐是一個(gè)古老的話題。在人類還沒(méi)有化學(xué)合成食品防腐劑之前，人們已經(jīng)尋找到了大量使食品保質(zhì)期延長(zhǎng)的辦法，如高鹽腌制、高糖蜜制、酸、酒、煙熏、水中、地下存放等等。</p><p&g

21、t;　　隨著食品工業(yè)的發(fā)展，傳統(tǒng)防腐方法已不能滿足其防腐需要，人們對(duì)食品防腐方法提出了更高的要求，要求操作更簡(jiǎn)單，保質(zhì)期更長(zhǎng)，防腐成本更低?；诖?，化學(xué)產(chǎn)品用于食品防腐的做法開(kāi)始流行。早期的化學(xué)防腐主要有甲醛、硝酸鹽類等高毒產(chǎn)品，以后又研究出苯甲酸、苯甲酸鈉、脫氫醋酸納、雙乙酸鈉等等數(shù)十種各類化學(xué)合成食品防腐劑。</p><p><b>　　防腐劑的危害</b></p><

22、;p>　　抑制物質(zhì)腐敗的藥劑。即對(duì)以腐敗物質(zhì)為代謝底物的微生物的生長(zhǎng)具有持續(xù)的抑制作用。重要的是它能在不同情況下抑制最易發(fā)生的腐敗作用，特別是在一般滅菌作用不充分時(shí)仍具有持續(xù)性的效果。對(duì)纖維和木材的防腐用礦油、煤焦油、丹寧，對(duì)生物標(biāo)本用甲醛、升汞、 甲苯對(duì)羥基苯甲酸丁酯、硝基衍生物或香脂類樹(shù)脂。在食品中使用防腐劑受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。特殊的防腐劑有乙酸等有機(jī)酸、以油酸脂為成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。

23、對(duì)于生物體的局部（如人體表面或消化道），可以根據(jù)具體條件采用各種防腐劑（如碘仿、水楊酸苯脂、苯胺染料等）。食品防腐劑能抑制微生物活動(dòng)，防止食品腐敗變質(zhì)，從而延長(zhǎng)食品的保質(zhì)期。絕大多數(shù)飲料和包裝食品想要長(zhǎng)期保存，往往都要添加食品防腐劑[1]。 </p><p>　　食品防腐劑對(duì)人體健康究竟有無(wú)危害呢？中國(guó)只批準(zhǔn)了32種允許使用的食品防腐劑，且都為低毒、安全性較高的品種。它們?cè)诒慌鷾?zhǔn)使用前都經(jīng)過(guò)了大量的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，有動(dòng)

24、物飼養(yǎng)和毒性毒理試驗(yàn)和鑒定，已證實(shí)對(duì)人體不會(huì)產(chǎn)生任何急性、亞急性或慢性危害。只要食品生產(chǎn)廠商所使用的食品防腐劑品種、數(shù)量和范圍，嚴(yán)格控制在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》 (GB2760-96)規(guī)定的范圍之內(nèi)，是絕對(duì)不會(huì)對(duì)人體健康造成損害的，人們大可放心食用。比如，在市場(chǎng)上所見(jiàn)到的食品通常會(huì)添加山梨酸鉀、苯甲酸鈉等防腐劑，這兩種應(yīng)用最廣泛的防腐劑被人體攝入后，一般會(huì)隨尿排泄，并不會(huì)在人體內(nèi)蓄積。 </p><p&g

25、t;　　當(dāng)然，食品防腐劑也是一把“雙刃劍”，也有可能給人們的健康帶來(lái)一定的麻煩。在我國(guó)，目前食品生產(chǎn)中使用的防腐劑絕大多數(shù)都是人工合成的，使用不當(dāng)會(huì)有一定的副作用；有些防腐劑甚至含有微量毒素，長(zhǎng)期過(guò)量攝入會(huì)對(duì)人體健康造成一定的損害。以目前廣泛使用的食品防腐劑苯甲酸為例，國(guó)際上對(duì)其使用一直存有爭(zhēng)議。比如，因?yàn)橐延斜郊姿峒捌溻c鹽蘊(yùn)積中毒的報(bào)道，歐共體兒童保護(hù)集團(tuán)認(rèn)為它不宜用于兒童食品中，日本也對(duì)它的使用做出了嚴(yán)格限制。即使是作為國(guó)際上公認(rèn)的

26、安全防腐劑之一山梨酸和山梨酸鉀，過(guò)量攝入也會(huì)影響人體新陳代謝的平衡。</p><p>　　雖然，《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》嚴(yán)格規(guī)定了防腐劑的種類、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和添加劑量，但令人感到十分遺憾和極為擔(dān)心的是，許多食品生產(chǎn)企業(yè)違規(guī)、違法亂用、濫用食品防腐劑的現(xiàn)象卻十分嚴(yán)重。主要表現(xiàn)在以下三個(gè)方面：(1)大劑量使用防腐劑。(2)使用廉價(jià)但毒副作用較大的防腐劑。(3)使用變質(zhì)的畜肉作香腸，為不影響香腸的外觀并掩蓋變質(zhì)的真相，使

27、用福爾馬林等作為防腐劑。</p><p>　　針對(duì)食品防腐劑使用方面存在的問(wèn)題以及人們對(duì)防腐劑的認(rèn)識(shí)誤區(qū)，中國(guó)消費(fèi)者協(xié)會(huì)在2001年第2號(hào)消費(fèi)警示中，鄭重提醒廣大消費(fèi)者：要正確認(rèn)識(shí)、理性看待食品中的防腐劑，掌握有關(guān)食品防腐劑的常識(shí)，以便在購(gòu)買食品時(shí)能明明白白選購(gòu)；兒童、孕婦等屬于身體發(fā)育特別時(shí)期的特殊人群，在食品的攝取方面應(yīng)該重點(diǎn)予以保護(hù)，建議不要給他們食用那些過(guò)多使用防腐劑的食品，以保障他們的身體健康；在選購(gòu)食

28、品、飲料時(shí)，盡可能購(gòu)買有信譽(yù)、質(zhì)量經(jīng)得起市場(chǎng)考驗(yàn)的產(chǎn)品，因?yàn)檫@類產(chǎn)品中使用防腐劑時(shí)更慎重、穩(wěn)妥，標(biāo)注也往往更真實(shí)；對(duì)一些中小企業(yè)在產(chǎn)品說(shuō)明或廣告中所宣稱的“本品絕對(duì)不含任何防腐劑”不要輕易相信。近年來(lái)，一些食品中必用的防腐劑也在向著安全、營(yíng)養(yǎng)、無(wú)公害的方向發(fā)展，諸如葡萄糖氧化酶、乳酸菌、殼聚糖、果膠分解物等新型防腐劑已經(jīng)出現(xiàn)，并被國(guó)家批準(zhǔn)使用，建議大家在盡可能的情況下應(yīng)首選含天然防腐劑的食品，以確保你的健康不受損害。 </p>

29、;<p>　　食品防腐劑的種類很多，主要分為合成和天然防腐劑；常用的合成防腐劑以山梨酸及其鹽、苯甲酸及其鹽等為代表。</p><p>　　1.4 防腐劑苯甲酸的處理方法</p><p>　　高效液相色譜法(HPLC)具有很高的靈敏度和很強(qiáng)的分辨能力，能使已存在于液相或可溶于液相的組分經(jīng)適當(dāng)處理得到很好的分離、定量。但在食品理化檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中只規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食

30、品中苯甲酸、山梨酸的高效液相色譜測(cè)定方法 ，以及汽水、果汁類、配制酒類糖精鈉高效液相色譜測(cè)定方法 。超聲萃取、震蕩提取及加熱是液相色譜處理樣品的常用手段，為了比較三者在測(cè)定果凍中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的效能，做了一系列的回收試驗(yàn)果凍是一種用海藻膠為原料制成的膠凍休閑食品，它秀色動(dòng)人、清涼可口，深受小朋友的喜愛(ài)。一些生產(chǎn)廠商為了降低成本，延長(zhǎng)保質(zhì)期，常在其中加入苯甲酸和山梨酸作為防腐劑，加入糖精鈉作為甜味劑。而這些添加劑對(duì)人體有一定的毒害

31、作用，國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)這些物質(zhì)的加入量有嚴(yán)格的規(guī)定。準(zhǔn)確而快速地測(cè)定果凍中這些添加劑的含量是打擊市場(chǎng)上劣質(zhì)產(chǎn)品的重要前提。但在食品理化檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中只規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸的高效液相色譜測(cè)定方法，以及汽水、果汁類、配制酒類糖精鈉高效液相色譜測(cè)定方法。通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較，發(fā)現(xiàn)在70℃ 水浴提取樣品具有操作簡(jiǎn)單快速，回收率高的優(yōu)點(diǎn)。究其原因，果凍一般是由</p><p>　　HPLC測(cè)定含乳飲料

32、中的山梨酸和苯甲酸含量。[3] 目前市場(chǎng)上各類舍乳飲料越來(lái)越多的得到人們的青睞，由于其含有豐富的蛋白質(zhì)、糖類及多種維生素，已成為小朋友的首選飲品。一般這類產(chǎn)品中都要添加一些山梨酸、苯甲酸(防腐劑)來(lái)延長(zhǎng)產(chǎn)品的保質(zhì)期，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其添加量有嚴(yán)格的規(guī)定。通常我們采用氣相色譜而不是液相色譜測(cè)定其含量。主要原因是液相色譜分析要求樣品通過(guò)0.45μm的膜凈化處理，而蛋白類飲料中蛋白分子大，加之此類產(chǎn)品添加各類穩(wěn)定劑、增稠劑，直接通過(guò)0.45 μ

33、m的膜阻力大、很難操作，且仍有部分較大分子進(jìn)入色譜柱造成柱壓升高等不可逆的柱損傷。本研究采用有機(jī)試劑萃取濃縮使樣品純化后進(jìn)樣測(cè)定[4]，可解決采用HPLC測(cè)定含乳餓料中山梨酸、苯甲酸時(shí)所存在的上述問(wèn)題本方法適用于難于直接過(guò)濾測(cè)定的含乳飲料中山梨酸、苯甲酸含量的測(cè)定，本方法可同時(shí)測(cè)定糖精鈉含量[7]。</p><p>　　HPLC測(cè)定腌熏臘肉中苯甲酸、山梨酸及前處理方法比較。食品的營(yíng)養(yǎng)豐富，極易受微生物污染而腐敗變

34、質(zhì)。為了保藏食品，防腐劑便成為重要的食品添加劑之一，在食品工業(yè)中廣泛使用，但各國(guó)對(duì)防腐劑的使用有一定的用量限制。我國(guó)GB/T5009．29—2003中主要是針對(duì)汽水、果汁、配制酒等液體樣品的測(cè)定進(jìn)行了闡述，GB/T10389—2004中只對(duì)肉與肉制品中山梨酸的測(cè)定進(jìn)行了闡述，均未對(duì)肉與肉制品中的苯甲酸和山梨酸的同時(shí)測(cè)定做具體的規(guī)定。據(jù)文獻(xiàn)[7]報(bào)道，對(duì)肉制品中的苯甲酸和山梨酸的測(cè)定常采用直接加水加蛋白沉淀劑定容提取的前處理方法，筆者比較

35、了氧化鋁層析及直接加水加蛋白沉淀劑定容提取測(cè)定腌熏臘肉制品中苯甲酸和山梨酸的2種前處理方法，并采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行HPLC測(cè)定。[6]</p><p>　　HPLC法測(cè)定飲料中苯甲酸含量的不確定度評(píng)定。在高效液相色譜法測(cè)量飲料中苯甲酸和山梨酸的過(guò)程中，測(cè)量不確定度的主要來(lái)源是樣品的取樣及稱量、預(yù)處理、轉(zhuǎn)移定容、標(biāo)準(zhǔn)溶液及其稀釋、儀器測(cè)量等。在高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定飲料中苯甲酸時(shí)，測(cè)量速度較慢，往往

36、一針需要7—10 min，做一條工作曲線需要兩小時(shí)左右，再測(cè)樣品時(shí)儀器的靈敏度發(fā)生了改變，所以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用單點(diǎn)校正法測(cè)定，盡量縮短測(cè)量時(shí)間。</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度盡量與待測(cè)溶液的濃度接近，可以消除儀器非線性影響，否則不在同一線性范圍內(nèi)，可能引起較大的不確定度，而單點(diǎn)校正法并沒(méi)有考慮線性影響，認(rèn)為是絕對(duì)線性，不存在不確定度的。</p><p>　　根據(jù)小分量不確定度不足最大分量

37、不確定度的1/3時(shí)，小分量不確定度可以忽略不計(jì)的原則[7] ，在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于玻璃器皿的膨脹系數(shù)、A級(jí)吸量器具的不確定度均可以忽略，但對(duì)于樣品預(yù)處理時(shí)使用的比色管等給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)較大的不確定度，實(shí)驗(yàn)時(shí)必須加以控制，通過(guò)這樣分析來(lái)源后，對(duì)于我們?cè)u(píng)定HPLC測(cè)量其他成分有很大的幫助。</p><p>　　同時(shí)通過(guò)對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定，了解了測(cè)定過(guò)程中哪些步驟是主要的不確定度來(lái)源．它能很好地指導(dǎo)我們?cè)诜治鲞^(guò)程中解決主要

38、矛盾，控制關(guān)鍵點(diǎn)，使檢驗(yàn)水平和分析質(zhì)量得到同步提高[8]。 </p><p><b>　　二 實(shí)驗(yàn)部分</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)方法：</b></p><p>　　上面敘述了幾種檢測(cè)方法，本實(shí)驗(yàn)采用的是高效液相色譜法。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)試劑

39、：</b></p><p>　　乙酸銨（分析純A.R）（500g），</p><p>　　苯甲酸（分析純A.R）（250g），</p><p>　　碳酸氫鈉（分析純A.R）（500g），</p><p>　　氨水（分析純A.R）（500g），</p><p>　　甲醇（分析純A.R）（500g），</

40、p><p><b>　　橙汁。</b></p><p><b>　　2.3 實(shí)驗(yàn)儀器：</b></p><p>　　AL204型電子天平，</p><p>　　GM-0.33Ⅱ型隔膜真空泵，</p><p><b>　　超聲波清洗器，</b></p&g

41、t;<p>　　依利特P230Ⅱ型高效液相色譜儀</p><p>　　加熱套，燒杯，移液管，容量瓶等</p><p><b>　　2.4色譜參考條件</b></p><p>　　2.4.1柱：TWG-C184.6mm×250mm，10um不銹鋼柱。</p><p>　　2.4.2流動(dòng)相：甲醇：乙酸

42、銨溶液（0.02mol/L）=10:90。</p><p>　　2.4.3流速：1ml/min。</p><p>　　2.4.4進(jìn)樣量：20ul。</p><p>　　2.4.5檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，230nm波長(zhǎng)，0.2AUFS。</p><p><b>　　2.5實(shí)驗(yàn)步驟：</b></p><p&g

43、t;　　2.5.1 甲醇：經(jīng)濾膜（0.5um）過(guò)濾。</p><p>　　2.5.2. 碳酸氫鈉溶液：秤取1.9665g碳酸氫鈉，加水定容至 100ml，振蕩溶解。</p><p>　　2.5.3 乙酸銨溶液（0.02mol/L）：秤取0.7717g乙酸銨，加水定容至500ml，溶解經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾。</p><p>　　2.5.4 .苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：秤取

44、0.1041g苯甲酸，加入碳酸氫鈉溶液5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶種，加水定容至100ml，苯甲酸含量為1mg/ml,作為儲(chǔ)備溶液。</p><p>　　2.5.5 移取氨水20ml家等體積的水混合制成（1+1）稀氨水。</p><p>　　2.5.6 秤取橙汁10ml，放入小燒杯中，用（1+1）氨水調(diào)PH約7，離心沉淀，上清液經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾。</p>&l

45、t;p>　　2.5.7 .取儲(chǔ)備液與待測(cè)液于小試管中，進(jìn)行高效液相色譜分析。</p><p>　　2.5.8 根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。估算待測(cè)液濃度</p><p>　　2.5.9 秤取儲(chǔ)備液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml定容至10ml，分別配置濃度為0.05（mg/mL）,0.1（mg/mL）,0.15（mg/mL）,0.2（mg/mL）,0.25（

46、mg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)溶液。進(jìn)行高效液相色譜分析。</p><p>　　2.5.10 取0.15mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)定。</p><p>　　2.5.11 回收率的測(cè)定</p><p>　　秤取5ml樣品，加入和5ml 0.2（mg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，振蕩搖勻，進(jìn)行高效液相色譜分析</p><p><b>　　三 結(jié)

47、果與討論</b></p><p><b>　　1、色譜條件</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)采用TWG-C184.6mm×250mm，10um不銹鋼柱。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相為甲醇：乙酸銨溶液（0.02mol/L）=10:90。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)的流速為1ml/min。</

48、p><p>　　實(shí)驗(yàn)的進(jìn)樣量為20ul。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，230nm波長(zhǎng)，0.2AUFS。</p><p>　　圖1. 樣品的液相色譜圖</p><p><b>　　2、標(biāo)準(zhǔn)曲線</b></p><p>　　2.1 樣品中苯甲酸含量的估算</p><

49、p><b>　　表一：</b></p><p>　　根據(jù)儲(chǔ)備液體的峰面積和濃度之間的比例值，估算待測(cè)液濃度約為0.128 mg/mL。</p><p>　　2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</p><p>　　在流速為1ml/min，波長(zhǎng)為230nm，流動(dòng)相為甲醇：乙酸銨溶液（0.02mol/L）=10:90。的色譜條件下，將不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作

50、液系列(0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 mg/ml )分別進(jìn)樣分析，外標(biāo)法定量。根據(jù)0.05 mg/ml，0.10mg/ml，0.15 mg/ml，0.20 mg/ml，0.25 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　以濃度為橫坐標(biāo)(C)，峰面積為縱坐標(biāo)(A)，求得苯甲酸的直線回歸方程為A=49734.7C+22.4，相關(guān)系數(shù)R2=0.998,結(jié)果表明：在0.0

51、5-0.25 mg/ml范圍內(nèi)，苯甲酸、濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。</p><p><b>　　表二： </b></p><p>　　圖2. 苯甲酸溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p><b>　　2.3 回收率實(shí)驗(yàn)</b></p><p>　　精密移取飲料樣品20．0 mL，添加濃度為2．0 g／L

52、的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液0．5 mL、1 mL或1．5 mL，即加標(biāo)量為10 mg／L或20 mg／L或30 mg／L。按樣品處理方法處理后進(jìn)樣分析，按直線回歸方程計(jì)算含量，作為測(cè)定值，將未添加標(biāo)準(zhǔn)貯備液的樣品含量結(jié)果作為本底值，計(jì)算回收率</p><p>　　圖3. 加標(biāo)量為0.2mg/ml的液相色譜圖</p><p>　　根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的出樣片，加標(biāo)樣的濃度：</p><

53、p><b>　　表三</b></p><p>　　根據(jù)質(zhì)量關(guān)系 (C測(cè)*10-C樣*5)/(加標(biāo)量*5) , 測(cè)定回收率</p><p><b>　　表四</b></p><p>　　根據(jù)質(zhì)量關(guān)系，得出的回收率約為80.75％，說(shuō)明該方法具有較好好的回收率，準(zhǔn)確度較高。</p><p>　　2

54、.4 方法的精密度（0.15）</p><p>　　根據(jù)重復(fù)值算出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差</p><p><b>　　表五</b></p><p>　　根據(jù)偏差值得標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.425％。</p><p>　　6組的重復(fù)實(shí)驗(yàn)是為了讓得出數(shù)據(jù)的誤差減小，進(jìn)入允許誤差范圍，使數(shù)據(jù)更加的準(zhǔn)確，可靠。</p><p&g

55、t;　　取各組分濃度均為50 mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)液，按確定的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算出兩種組分的精密度，苯甲酸、RSD分別為0.425％、。表明測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性良好。</p><p><b>　　四 結(jié)論</b></p><p>　　該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相比 分離效果好。根據(jù)儲(chǔ)備液體的峰面積和濃度之間的比例值，估算待測(cè)液濃度約為0.128 mg/mL。根據(jù)0

56、.05 mg/ml，0.10mg/ml，0.15 mg/ml，0.20 mg/ml，0.25 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的出樣片，結(jié)果測(cè)得加標(biāo)樣的濃度約為0.1544 mg/mL。根據(jù)質(zhì)量關(guān)系，得出的回收率約為80.75％。根據(jù)偏差值得標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.425％。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　戎江瑞. 3

57、種不同前處理方法在HPLC測(cè)定果凍中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的實(shí)驗(yàn)比較：中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志[J]. 2005,15( 7 ): 885- 887 </p><p>　　李明元. 高效液相色譜法及其在食品分析中的應(yīng)用. 北京大學(xué)出版杜,1998(9):97 </p><p>　　GB/T 5009.29-1996,食品中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定方法</p><p>　　部

58、建仙．功能性食品．中國(guó)輕工業(yè)出版杜,1997,197 </p><p>　　殷茂榮,張存玲,王勤．高效液相色譜法測(cè)定某些食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸等預(yù)處理方法的探討.衛(wèi)生研究,2002,(1)：26-27</p><p>　　李雪琴,苗笑亮,郝莉花等.HPLC測(cè)定肉制品中山梨酸方法的改進(jìn)[J].食品科技,2006,(7)：225-229</p><p>　　中