影響辣椒花藥培養(yǎng)胚狀體誘導(dǎo)效率的因素研究.pdf

1、本文通過對辣椒花蕾大小、花蕾外部形態(tài)和小孢子發(fā)育時期的觀測比較，確定了花藥培養(yǎng)方便可靠的選材方法，并對影響辣椒花藥培養(yǎng)效果的基因型、溫度預(yù)處理、高溫誘導(dǎo)，培養(yǎng)基中活性炭、硝酸銀和激素的濃度等關(guān)鍵因素進行了研究探索，主要研究結(jié)果如下： 1、小孢子子發(fā)育時期與花蕾的外部形態(tài)特征之間有一定的對應(yīng)關(guān)系。當(dāng)花萼包住花瓣，花瓣綠色，萼長于瓣，花藥綠白色時，多數(shù)小孢子處于四分體時期或單核早期：當(dāng)花瓣微露、花瓣綠白色，萼瓣等長或瓣稍長，花藥頂端

2、略紫時，大多數(shù)小孢子處于單核靠邊期；當(dāng)花瓣明顯露出花萼，花瓣綠白色或白色，瓣長于萼，花藥全紫時，大多數(shù)小孢子處于雙核時期。 2、辣椒的花藥培養(yǎng)受供體植株的基因型影響顯著，基因型不同，花藥的胚狀體誘導(dǎo)率不同。本試驗供試的品種19個，有17個誘導(dǎo)出了胚狀體，材料誘導(dǎo)成功率達(dá)89％。對不同的低溫預(yù)處理時間，培養(yǎng)基中添加物，不同激素濃度的反應(yīng)，品種間都表現(xiàn)出了較大的差異，誘導(dǎo)率最高的是PN3-13，達(dá)到了5.125％；P142只誘導(dǎo)出兩

3、個胚狀體：在同樣的條件下，PN3-8-9，PN1-5南兩個基因型則沒有誘導(dǎo)出胚狀體。 3、低溫預(yù)處理可以明顯提高胚狀體誘導(dǎo)率。P120、PN3-13②、P130三份材料在4℃低溫預(yù)處理3d時胚狀體誘導(dǎo)率達(dá)到最高；P140、PN1-4處理5d時誘導(dǎo)率達(dá)到最高，以P140在5d時達(dá)到了7.272％的最高點。培養(yǎng)經(jīng)低溫預(yù)處理1～5d的材料，誘導(dǎo)率隨預(yù)處理時間的延長呈先升而后降的趨勢，在預(yù)處理3d或者5d達(dá)到最高，超過5d后誘導(dǎo)率急劇下

4、降，未處理（CK）的辣椒花藥培養(yǎng)胚狀體誘導(dǎo)率則很低（小于1胚/100花藥）甚至不出胚。 4、接種后，對5份辣椒基因型進行了（33±1℃）高溫處理，處理時間分別為1d、3d、5d、7d、9d和11d，以未進行高溫處理為對照。結(jié)果表明：高溫處理明顯提高了辣椒胚狀體誘導(dǎo)率。高溫處理3d后，隨著處理時間的延長，每個基因型的誘導(dǎo)率都有增加，當(dāng)高溫處理7d或9d時，誘導(dǎo)率達(dá)到了最高，而超過9d，誘導(dǎo)率又有下降的趨勢，處理11d時誘導(dǎo)率則急劇

5、下降。 5、在分別添加10，50，100μmol/L三個濃度水平的AgNO3的培養(yǎng)基上，3個基因型的胚狀體誘導(dǎo)率均有一定的提高。并且在一定濃度范圍內(nèi)，胚狀體誘導(dǎo)率隨著添加硝酸銀濃度的增加而提高，在硝酸銀濃度達(dá)到50μmol/L時，誘導(dǎo)率達(dá)到最大；此后，隨著濃度的增加，誘導(dǎo)率則呈下降趨勢。 6、在活性炭濃度分別為0（CK）0.3％、0.5％、1.0％的培養(yǎng)基上，對P140、P120、PN3-13和PN1-4四個基因型進行花

6、藥培養(yǎng)，PN3-13、PN1-4兩個基因型在CK培養(yǎng)基上沒有胚狀體的出現(xiàn)，而在添加0.3％-1.0％活性炭的培養(yǎng)基中均能誘導(dǎo)出胚狀體；P140、P120在CK培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率極低，而在添加0.3％-1.0％活性炭的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)率增加；并在濃度為1％時誘導(dǎo)率達(dá)到最高。 7、添加適量的激素也可以提高辣椒培養(yǎng)效果，在低濃度的2，4-D（0.1mg/L）的培養(yǎng)基上，接種的四個辣椒基因型的胚狀體誘導(dǎo)率均有不同程度提高，其中有三個基因型（P1

7、20、P132、P134）的誘導(dǎo)率比對照增加達(dá)到極顯著水平：當(dāng)2，4-D濃度達(dá)到0.5mg/L以上時，誘導(dǎo)率呈下降趨勢。 8、培養(yǎng)基中添加低濃度的KT（0.1mg/L）可顯著提高辣椒胚狀體的誘導(dǎo)率，當(dāng)KT濃度升高時誘導(dǎo)率有不同程度下降。培養(yǎng)基中添加低濃度的KT（0.1mg/L）可顯著提高辣椒胚狀體的誘導(dǎo)率。 9、試驗表明，在三個辣椒基因型中，P140和PN1-13的誘導(dǎo)率隨著添加NAA濃度的增加而提高，在濃度達(dá)到1.0m