三葉半夏花藥培養(yǎng)與多倍體誘導研究.pdf

1、半夏為天南星科多年生宿根草本植物，是我國重要的中藥材。由于人們的過度采挖和生態(tài)環(huán)境的改變，其野生資源瀕臨枯竭，人工栽培又面臨種質(zhì)混雜、品質(zhì)衰退、產(chǎn)量下降等問題，不能滿足市場的需要。目前，國內(nèi)對半夏新種質(zhì)選育研究很少，本試驗以不同葉形半夏為材料，通過花藥培養(yǎng)、°源生質(zhì)體培養(yǎng)、多倍體誘導等方法，對半夏的育種工作做了初步的研究，以期找到最佳的誘導方法，為半夏的育種工作奠定基礎(chǔ)，期望獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的半夏新種質(zhì)。主要研究結(jié)果如下： 1.用組

2、織培養(yǎng)方法對3種不同葉形的三葉半夏進行花藥培養(yǎng)和單倍體誘導。三葉半夏花藥愈傷組織的誘導受小孢子發(fā)育時期、培養(yǎng)基、基因型、低溫預處理等因素的影響。4℃預處理5d后，三葉半夏花藥在N6+2，4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+5％蔗糖+0.8％瓊脂的培養(yǎng)基中愈傷組織誘導效果最佳。不同葉型的三葉半夏花藥都誘導出了愈傷組織，誘導率分別為：桃葉型半夏BX-t最高，為4.25％，芍藥葉型半夏Bx-s為2.08％，柳葉型半夏BX-1最低，為

3、0.99％。觀察花培植株根尖染色體，結(jié)果表明桃葉形半夏BX-t花藥培養(yǎng)誘導出的植株染色體已減半。 2.對三葉半夏原生質(zhì)體分離條件進行研究，用三葉半夏BX-t組培苗幼嫩葉片分離原生質(zhì)體時，最適滲透壓調(diào)節(jié)劑為0.6mol/L甘露醇；最適酶組合是1％纖維素酶+0.5％離析酶+0.1％果膠酶；最適酶解時間為5h；用CPW11原生質(zhì)體洗液純化的效果較好，產(chǎn)量和活力都最高，分別為5.26×105個/gFW和82.4％。 3.以山東桃

4、葉形三葉半夏BX-st為試驗材料，利用秋水仙素結(jié)合組織培養(yǎng)技術(shù)進行了多倍體植株的誘導研究，采用浸漬法和混培法。并對獲得的不同倍性半夏進行了形態(tài)學、細胞學和光和生理等方面的研究。研究的主要結(jié)論如下： (1)混培法中，以半夏葉柄為材料，秋水仙素濃度為0.1％，處理20d，變異率最高為2.5％；以莖尖為材料，秋水仙素濃度為0.01％，處理20d，變異率最高為25％；以愈傷組織為材料，秋水仙素濃度為0.01％，處理20d，變異率最高為2

5、0％。 (2)浸漬法中，以叢生芽為材料，0.03％秋水仙素溶液處理24h效果最好，獲得的變異植株最多，變異率也最高，為32.5％。浸漬法優(yōu)于混培法。 (3)根尖細胞染色體鑒定表明：變異半夏植株的根尖染色體數(shù)(2n=182)為原對照半夏(2n=91)的2倍；利用流式細胞儀測定葉片單細胞DNA含量表明，變異植株葉片單細胞DNA含量比對照植株明顯加倍。 (4)變異半夏植株與對照半夏植株相比，葉片增厚、葉色加深、葉柄粗壯