抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究與建立

1、抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究與建立,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,抗生素標(biāo)準(zhǔn)品的建立、制備原則,1、溯源性 可溯源性是抗生素效價及含量測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本要求。抗生素效價單位一但確定，就將一直延續(xù)下去

2、。 通常溯源性和測量的可靠性有關(guān)，即與效價單位確定及量值傳遞的準(zhǔn)確性和精密度有關(guān)。故在建立抗生素原始基準(zhǔn)品時，當(dāng)定義了效價單位后，通常需要用多種方法分析原始基準(zhǔn)品的純度，進(jìn)而確定其效價，保證原始基準(zhǔn)品定值的準(zhǔn)確性；在標(biāo)定各級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時，通常要采用協(xié)作標(biāo)定的方法，已保證獲得準(zhǔn)確量值傳遞結(jié)果。,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：17556963

3、2,2、同質(zhì)性 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成通常要求和待測定物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成完全相同。 標(biāo)準(zhǔn)品與待標(biāo)樣品量反應(yīng)“作用性質(zhì)”的一致。 判斷同質(zhì)性的關(guān)鍵并非其化學(xué)結(jié)構(gòu)是否相同，而是其量反應(yīng)曲線是否平行,3、連續(xù)性 抗生素的臨床應(yīng)用劑量均以抗生素的效價單位為基礎(chǔ)，且在抗生素開發(fā)的前期依據(jù)其當(dāng)時測定的效價結(jié)果而制定。故抗生素的效價單位一經(jīng)確定，將一直延續(xù)下去，不得改動 仿制品種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的效價單位應(yīng)與該品種原始發(fā)明國家標(biāo)

4、準(zhǔn)物質(zhì)的效價單位一致?？股貥?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在改變測定方法時，如四霉素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)品在轉(zhuǎn)為含量測定用對照品時，不該動原以鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素重量計量的效價單位。,4、穩(wěn)定性 在保證其“同質(zhì)作用”的前提下，選用具有穩(wěn)定固態(tài)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料。根據(jù)此原則，對氨基糖甙類抗生素，通常選用其硫酸鹽而不直接選用其堿作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料；對?－內(nèi)酰胺抗生素，如選用頭孢唑林酸而不用頭孢唑林鈉制備頭孢唑林對照品；用阿莫西林三水物制備阿莫

5、西林對照品而不用阿莫西林一水物或阿莫西林鈉制備其對照品。,抗生素原始基準(zhǔn)品的建立：,確定抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱、效價單位和表示方法選取原料：盡可能純化基準(zhǔn)品原料原料組成分析（如：水分、揮發(fā)性物質(zhì)、無機雜質(zhì)殘留溶劑等）及測定基準(zhǔn)品的純度分析確定基準(zhǔn)品的含量。驗證,抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)命名原則,1、基本原則 絕大部分抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不考慮其原料結(jié)構(gòu)中的無機鹽離子、結(jié)晶水、酸根等，而是以其在臨床應(yīng)用中起作用的活性結(jié)構(gòu)命名。

6、,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,,,,2、酯類抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),3、多種名稱的命名,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,4、特例,根據(jù)專有用途進(jìn)行命名：如加替沙星對照品和加替沙星·3/2H2O對照品，前者為加替沙星鑒別及含量測定用對照品，

7、后者為供含3/2H2O結(jié)晶水的加替沙星原料的紅外鑒別用對照品。在首次研發(fā)時，以臨床研究中起活性作用的計量結(jié)構(gòu)命名。如鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素，鹽酸阿霉素等。,抗生素效價單位的確定及問題,1、單組分抗生素：（1）以活性成分的重量計量效價單位 例如：硫酸鏈霉素，其活性成為為鏈霉素堿，鏈霉素的效價單位為鏈霉素堿1?g＝1單位，硫酸鏈霉素效價的理論值為：,,（2）以純抗生素制品鹽的重量計量效價單位 此效價單位中包

8、括了無效鹽的成分，從理論上講是不合理的，但對一些早期的抗生素品種，由于多年來已經(jīng)習(xí)慣于此，如改變原以制品鹽重量計量效價單位，則對臨床用藥的影響較大，故仍沿用。目前常用的抗生素品種中僅有四環(huán)素、金霉素二個品種的效價單位采用這種效價單位計量方法。例如： 鹽酸四環(huán)素的效價單位（C22H24O8N2·HCl）1?g＝1四環(huán)素單位； 鹽酸金霉素的效價單位為（C22H23O8N2·HCl）1?g＝1金霉素單位。

9、 但對蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，如鹽酸阿霉素（C27H29NO11·HCl）、鹽酸依達(dá)吡星等，其效價單位也是以其鹽酸鹽的重量計量效價單位的。,（3）特定效價單位,對一些早期開發(fā)的組分較為復(fù)雜的抗生素，在開始生產(chǎn)及臨床使用時，由于研究手段、生產(chǎn)條件等的限制，無法獲得其準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)及組成，或無法得到其純品，還不能用重量單位來計量其效價單位，只能人為指定效價單位。如青霉素單位也稱牛津單位（Oxford unit）

10、的最初定義是“50ml肉湯培養(yǎng)基中，能抑制標(biāo)準(zhǔn)金葡菌生長的最少青霉素量為1個青霉素單位”。 在獲得青霉素G純品后，證明青霉素G鈉（C16H17N2NaO4S）0.5988?g＝1青霉素單位。目前使用特定效價單位的抗生素品種還有制霉菌素、桿菌肽、多粘菌素等。,2、多組分抗生素效價單位的確定,（1）以其中單一組分的活性成分的重量確定效價單位。如慶大霉素含有C1、C1a、C2a、C2等多個組分，慶大霉素的效價單位以C1（C

11、21H43O7N5）來計量，1?g的C1＝1慶大霉素單位。采用這種方法確定效價單位在“溯源性”方面較為明確，且便于建立原始基準(zhǔn)品，并可保證標(biāo)定中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于和待標(biāo)樣品不存在非“同質(zhì)”問題，這是目前鼓勵采用的方法。,（2）將多個抗生素組分按一定比例混合，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如螺旋霉素主要為含I、II、III三個組分的混合物，其效價單位定義為1?g混合物?50％的組分I（C43H74N2O14）、25％的組分II（C45H7

12、6N2O14）和25％的組分III（C46H78N2O14）?＝1螺旋霉素單位。采用這種方法的缺點在于建立原始基準(zhǔn)品比較麻煩。,天馬行空官方博客：http://t.qq.com/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632,（3）多個抗生素組分不定比例的混合物，以混合組分活性成分的重量確定效價單位。如吉它霉素為含有A1、A3、A4、A5、A6、A7等的多組分抗生素，其效價單位定義為1?g吉它霉素混合物（

13、C37－42H61－69NO14－15）＝1吉它霉素單位。此效價單位類似于特定效價單位，其“溯源性”較模糊，目前新藥開發(fā)中不鼓勵使用。,1、有明確溯源 —多為進(jìn)口藥品檢驗用國家原始基準(zhǔn)品的建立,基準(zhǔn)品建立的類型,2、無明確溯源的 —如：新藥注冊中的仿制藥：地紅霉素、司丙紅霉素、頭孢吡肟等。,（1）、根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）基準(zhǔn)品建立的指導(dǎo)原則，采用多種測試分析方法，分析確定原料的純度和雜質(zhì)的含量

14、。以扣除法確定原料的含量。（2）、在可以得到企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品/對照品或原始發(fā)明廠的標(biāo)準(zhǔn)品/對照品的情況下：a、以企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)品/對照品為對照，進(jìn)行標(biāo)定。驗證方法（1）的結(jié)果。b、原始發(fā)明廠的標(biāo)準(zhǔn)品/對照品或以有明確溯源的標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)進(jìn)行協(xié)作標(biāo)定。（3）在確定首批標(biāo)準(zhǔn)品、對照品的量值中，一般采用將方法（1）的結(jié)果與標(biāo)定結(jié)果合并計算，作為首批標(biāo)準(zhǔn)品/對照品的含量。或以方法（2）結(jié)果核對或校正方法（1）結(jié)果，即可驗證方法（1）結(jié)果的準(zhǔn)確性，又

15、不侵犯知識產(chǎn)權(quán)。,3、無量值溯源 —新藥注冊中的國家一類新藥，如頭孢硫脒,頭孢硫瞇是我國自主研制的國家一類新藥。在世界衛(wèi)生組織（WHO）基準(zhǔn)品建立的指導(dǎo)下，結(jié)合我室多年來根據(jù)建立首批標(biāo)準(zhǔn)品/對照品的經(jīng)驗，按照“基準(zhǔn)品效價定義→組成分析→純度分析→含量確定→結(jié)果驗證”的基本步驟，研制建立國首批基準(zhǔn)品。如：力達(dá)霉素、安妥沙星、卡德沙星等基準(zhǔn)品。,1、命名及效價單位確定,2、組成分析,,,理論值分析,元素測

16、定,根據(jù)已知分子式計算理論含量,根據(jù)N,S元素測定結(jié)果，推測純度,,,有機成分,無機成分,,揮發(fā)性物質(zhì),無機雜質(zhì),鹽、酸根的量,費休氏法，干燥失重，TGA,熾灼殘渣，TGA,離子電位滴定法,,,,3、純度分析,直接測定法,間接測定法,DSC、NMR、HPLC－ELSD歸一化法、HPLC－IR歸一化法,有機雜質(zhì)的分析與測定,純度的測定,TLC、HPLC－不同的檢測器聯(lián)用、HPCE,HPLC－ELSD自身對照法,,,,,,,4、含量確

17、定,,直接扣除法,,效價（u/mg）＝(1－水分或揮發(fā)性物質(zhì)％－殘留溶劑％ －殘渣％) ?純度％?1000(u/mg) 含量（％）=(1－水分或揮發(fā)性物質(zhì)％－殘留溶劑％ －殘渣％) ?純度％,HPLC－ELSD隨行曲線法,外標(biāo)法,抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定原則,1、確保量值傳遞的連續(xù)性國家標(biāo)準(zhǔn)收載的大部分抗生素或為仿制品，或由國外進(jìn)口。換批制備以中檢所

18、提供保存標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為基準(zhǔn)；定期以國際通用藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)核對校驗。,2、確保量值傳遞的準(zhǔn)確性,采用現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載的方法。采用合理的實驗設(shè)計減少實驗偏差。采用加權(quán)平均的原理進(jìn)行合并計算。標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定結(jié)果除應(yīng)求出其標(biāo)示效價或含量結(jié)果外，還應(yīng)以95％的置信限表征其誤差范圍。對純度較高的樣品可由化學(xué)法直接標(biāo)定,3、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值傳遞的質(zhì)量保證－協(xié)作標(biāo)定方式,中檢所職責(zé)協(xié)作標(biāo)定單位之一對標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)從原材料選擇、制備方法

19、、標(biāo)定方案及分裝與包裝條件等進(jìn)行全面技術(shù)工作和資料審核對各協(xié)作單位上報的標(biāo)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析及定值。同時對定值準(zhǔn)確性、量值溯源及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性作出全面的評價。對可否作為國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的結(jié)論。將國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備報告報送室、所級技術(shù)負(fù)責(zé)人 審核或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)專家委員會（首批基準(zhǔn)品）審核。將協(xié)作標(biāo)定結(jié)果及統(tǒng)計分析結(jié)果以公文的形式反饋給協(xié)作單位。負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保存、發(fā)放及管理。,協(xié)作單位職責(zé)具備相當(dāng)?shù)膶嶒炘O(shè)備及符合要求的實驗技術(shù)人員。

20、參加協(xié)作標(biāo)定人員：應(yīng)按協(xié)作標(biāo)定技術(shù)要求和sop操作，獨立完成協(xié)作標(biāo)定工作。提供符合協(xié)作技術(shù)要求的測定結(jié)果和原始數(shù)據(jù)。寫出協(xié)作標(biāo)定報告并對測定結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。協(xié)作人員在無任何確定的試驗失誤情況下不得隨意剔出測定結(jié)果。項目負(fù)責(zé)人：組織并按時完成協(xié)作標(biāo)定工作。對本協(xié)作單位的試驗結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，寫出協(xié)作標(biāo)定報告。將協(xié)作標(biāo)定結(jié)果和全部原始資料或復(fù)印件以公文和公文附件形式報送中檢所。協(xié)作單位不得以任何形式泄露協(xié)作結(jié)果，或與其他同品種的協(xié)作

21、單位核對數(shù)據(jù)。,,羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品協(xié)作標(biāo)定,頭孢氨芐對照品協(xié)作標(biāo)定,,抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用,抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可分為生物標(biāo)準(zhǔn)品和化學(xué)對藥品。生物標(biāo)準(zhǔn)品主要用于抗生素微生物效價測定，而化學(xué)對照品則主要用于鑒別，有關(guān)物質(zhì)和含量測定用。 各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)必須嚴(yán)格按照其規(guī)定的用途使用，不可混用。,由于抗生素是一類化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的生物活性物質(zhì)，其標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)都熔封在安瓶中，必須按照抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用說明書的要求進(jìn)行使用和保存，特別應(yīng)注意低溫（5