梅毒的實驗室檢查概要

1、2014-10-8,梅毒的實驗室檢查,梅毒（TP）生物學特性,1、小而纖細的螺旋狀微生物，長5～20um,粗細﹤0.2um2、有6～12個規(guī)則的螺旋基本結構為一原生質的圓柱體，為兩層膜所圍繞。3、螺旋整齊、數(shù)目固定、折光性強，較其他螺旋體亮，運動緩慢而有規(guī)律，有三種運動方式：圍繞其長軸旋轉運動；伸縮其螺旋間距離移動；彎曲扭動如蛇行。4、人是梅毒螺旋體的唯一自然宿主，梅毒螺旋體不能在體外培養(yǎng)繁殖，最適生存溫度是37℃，離開人體很快死

2、亡，煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒劑如雙氧水、酒精等很容易將其殺滅。,3,微生物形態(tài) 規(guī)則螺旋體 一端/兩端鉤狀，菌體成8、S或C形 在暗視野顯微鏡下運動活潑 G-, Fontana鍍銀染色,染成棕褐色,4,形態(tài)與 染色,暗視野顯微鏡下觀察,5,梅毒螺旋體,梅毒螺旋體，F(xiàn)ontana鍍銀染色,傳播途徑,梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與梅毒患者的性接觸中， 皮膚或粘膜若有細

3、微破損則可得病。 獲得性梅毒 （后天）早期梅毒病人是傳染源，95%是通過不潔性交傳染，少數(shù)通過接吻， 握手、輸血、接觸污染的內衣濕毛巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。 胎兒梅毒（先天 ）：孕婦體內螺旋體，一般在妊娠3—4月通過胎盤感染嬰兒。,免疫性,特異性抗體感染2周后產生特異性IgM抗體, 不能通過胎盤感染4周后出現(xiàn)特異性IgG及IgA抗體,可通過胎盤，非特異性抗體刺激機體產生抗心磷脂抗體/反應素RPR 和 TRUST等

4、方法可檢出：5～7周或硬下疳后2～3周完全治愈的早期梅毒可再感染,梅毒的實驗室檢測方法,顯微鏡檢測法： （1） 暗視野顯微鏡檢查 （2） 鍍銀染色檢查梅毒血清學檢測法： （1）非梅毒螺旋體抗原血清試驗 （2）梅毒螺旋體抗原血清試驗,暗視野顯微鏡檢查,標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮膚或粘膜的滲出液、淋巴結穿刺液觀察：在暗視野顯微鏡下，先用低倍鏡，再轉至高倍鏡，梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光

5、，螺旋整齊，運動規(guī)律。結果解釋：陰性結果不能排除梅毒 可能是：①螺旋體數(shù)量不足 ②已用過抗生素或某些外用藥 ③損害接近自然消除,暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體,螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方 法，WHO指定其為性病實驗室必備項目之一,鍍銀染色檢查,基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結果：棕褐色的梅

6、毒螺旋體,梅毒血清學試驗 非梅毒螺旋體抗原試驗：VDRL、RPR、TRUST 梅毒螺旋體抗原試驗：ELISA、TPPA、FTA-ABS,,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、人感染TP后組織受到破壞,裂解出的一種類脂成分與梅毒螺旋體的蛋白質結合后成為抗原刺激機體產生抗類脂質抗體,即反應素。2、其他疾病也可產生此種抗體，可出現(xiàn)假陽性。3、敏感性低，盡60﹪左右，有漏檢現(xiàn)象。4、感染初期（4周內），可呈陰性。6～8周后達10

7、0 ﹪.但治愈后3 ～ 6個月可消失。5、反應素的量可反映組織的損傷程度，半定量檢測可提示與梅毒的活動有關。,非梅毒螺旋體抗原試驗,用心磷脂作抗原，測定血清中抗心磷脂抗體，亦稱反應素。敏感性高而特異性較低，且易發(fā)生生物學假陽性。早期梅毒患者經充分治療后，反應素可以消失，早期未經治療者到晚期，部分病人中反應素也可減少或消失。目前一般作為篩選和定量試驗，觀察療效，復發(fā)及再感染。,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、性病研究實驗室試驗（VDRL

8、）：用心磷脂及膽固醇為抗原。缺點：抗原每天配制：血清標本加熱滅活；結果在顯微鏡下觀察。2、不加熱血清反應素玻片試驗（USR):也是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似，扔需顯微鏡下觀察。3、快速血漿反應素試驗（RPR):是VDLR抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似，加入特制碳粉，可肉眼讀出結果。4、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST):加特制的甲苯胺紅，穩(wěn)定、顆粒均勻，生產批間差小，結果易觀察。,梅毒螺旋體抗原血

9、清試驗,用活的或死的梅毒螺旋體或其成分來作抗原，測定抗螺旋體抗體。敏感性和特異性均高，一般用作確證試驗。檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG抗體，即使患者經過足夠治療，仍能長期存在，甚至終身不消失，此抗體無保護免疫力，血清反應仍持續(xù)存在陽性，不能用于觀察療效。,梅毒螺旋體抗原血清試驗,熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS TEST)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA),FTA-ABS,間

10、接熒光抗體技術較敏感和較特異的試驗，公認為金標準梅毒螺旋體Nichols株作抗原，Reiter株進行吸收FITC熒光素標記的抗人抗體步驟多，對照多，結果判定需要經驗,TPPA,特異性和敏感性均高，檢測的是IgM抗體，但操作繁瑣，費用高。TPPA取代TPHA明膠顆粒取代紅細胞用于抗原的致敏，不需要吸收過程。非特異性凝集少對反應板、槍頭要求高,TP-ELISA,抗原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測的是IgM或IgG抗

11、體敏感性和特異性與其他試劑基本一致應作進一步評價,梅毒血清試驗假陽性反應因素：技術性反應：標本的污染溶血操作失誤生物學假陽性反應：感染性疾病：麻風、麻疹、瘧疾、傳染性肝炎、病毒性肺炎、傳染性單核細胞增多癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、非典型肺炎等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中，產生反應素。生理機能發(fā)生變化：妊娠可出現(xiàn)陽性，但這類患者血清反應滴度低，很少超過1：8。半年內漸轉成陰性。,梅毒血清試驗假陰性反應因素：

12、,在梅毒螺旋體感染后1～2周內可呈陰性反應梅毒螺旋體感染不久即開始治療晚期梅毒患者的血清中反應素含量低，敏感性低的梅毒血清試驗易出現(xiàn)陰性反應在二期梅毒時RPR試驗也可出現(xiàn)陰性反應，即前帶現(xiàn)象,三種方法聯(lián)合檢測,TRUST ELISA TPPA,,,,,,減少假陽性，假陰性,血清學檢測的幾個特點：,在最初的兩周可能是陰性結果FTA、TPPA和ELISA在所有階段都最敏感VDRL、RPR/TRUS

13、T在三期梅毒期可能為陰性VDRL-CSF僅用于診斷神經性梅毒,梅毒檢測流程圖,,,,,A1(ELISA),,A1+,,,A1-,,,A2(PRP或TRUST）,,,A1+A2+感染：既往或現(xiàn)在,,,,A1+A2-,,,A3（TPPA）,A1+A2-A3+可能是梅毒感染需結合臨床表現(xiàn),,,A1+A2-A3-基本排除梅毒潛伏期,,,,,,,,,,,,,,,,美國2009年指南,梅毒血清學檢測策略,WHO推薦同時采用非梅毒螺旋體和