凝血分析前變異

1、凝血分析前變異,SYSMEX市場部李強(qiáng),,凝血檢查結(jié)果的影響因素,,采血樣本處理,,溶解處理,,狀態(tài)機(jī)械維護(hù)保養(yǎng),樣本,試劑,分析儀,,病人,狀態(tài),,實(shí)驗室誤差分析,Plebani和 Carraro分析了40,490份為期3個月的帕多瓦大學(xué)醫(yī)院的實(shí)驗室的結(jié)果 - 189 個誤差 (0.47%)13% - 分析中18% - 分析后68% - 分析前189個有誤差的結(jié)果中有四分

2、之一導(dǎo)致了不必要的檢查和不恰當(dāng)?shù)闹委熀妥o(hù)理。.Mario Plebania and Paolo Carraro. Mistakes in a stat laboratory: Types and frequency. Clinical Chemistry. 1997;43:1348-1351.,,,病人- 相關(guān)變異因素,飲食,肥胖,年齡,月經(jīng),藥物,酒精,血型,吸煙,性別,,,,,,,,,,“O’ 型血的 vWF 和 FVI

3、II 比非“O”.型血活性低,阿司匹林，華發(fā)林，肝素等影響凝血和血小板功能,酒精能夠抑制血小板的功能,富含維生素K對華發(fā)林有反作用 (INR 下降).,妊娠,絕經(jīng),女性出血時間更長,不同的狀態(tài)凝血功能不一樣,促凝因子增加 纖溶功能減弱 AT和 PC 活性升高,與心血管疾病有關(guān). FVII抗原和活性升高,許多凝血因子隨著年齡的增加而升高,Altered, Coagulation Lysis Or Thrombosis:

4、The Clotting Times, volume 4, Issue 1, April 2004,樣本的質(zhì)量最為重要，因此控制好樣本的采集程序非常必要,采血方法抗凝劑 (類型和用量)樣本量,分析前變異,,,樣本處理 準(zhǔn)備 儲存 復(fù)溶和穩(wěn)定性,樣本采集,分析前變異,?　

5、靜脈穿刺正確：CLSI 推薦采用含有抗凝劑的真空采血裝置如果使用注射器，需要使用小容量的注射器 (≤20 mL)，材質(zhì)使用塑料或硅化的玻璃錯誤止血帶壓迫時間延長導(dǎo)致組織液滲出和溶血，理想的情況應(yīng)該是止血帶使用時間不超過1分鐘使用注射器/針頭會增加溶血和凝血的風(fēng)險 抽血不順利會影響結(jié)果,分析前變異,?　靜脈穿刺正確應(yīng)該根據(jù)采血量、病人的年齡、靜脈的大小決定合適規(guī)格的針頭 如果使用靜脈留置管采樣，首先吸取5mL血液潤洗

6、管道，減少肝素的污染。錯誤避免創(chuàng)傷引起溶血。小的針頭會引起血小板的破壞和溶血,分析前變異,?　推薦的采血順序 凝血樣本應(yīng)該放在第二或第三管 血培養(yǎng)管 普通血清玻璃管 凝血樣本枸櫞酸鈉抗凝管 凝膠血清分離管/普通血清塑料管 肝素管

7、 EDTA血常規(guī)管 葡萄糖管,,,? 樣本管的混勻 正確血液進(jìn)入試管后，輕輕的顛倒混勻3到4次 錯誤不要使用試管搖床 混勻次數(shù)用力過猛或次數(shù)過多，容易引起溶血和血小板激活,,分析前變異,= 1 inversion,分析前變異,? 抗凝劑類型正確推薦枸櫞酸鈉濃度 105 to 109 mmol/L, 3.13% to 3.2% 錯誤其他濃

8、度(3.8%)和其他抗凝劑(例如：草酸鈣，肝素，EDTA),分析前變異,? 血液/抗凝劑比率正確9：1錯誤充盈不足，血液/抗凝劑比例下降，導(dǎo)致結(jié)果假性延長充盈過度，血液/抗凝劑比例升高，引起結(jié)果錯誤或標(biāo)本凝固,分析前變異,? 抗凝劑濃度調(diào)整當(dāng)壓積大于55%，需要調(diào)整抗凝劑比例對壓積低于20%的血液，暫時沒有推薦的調(diào)整比例.,計算公式：X = (100 - PCV)/(595 - PCV)X為每毫升抗凝標(biāo)本所用抗凝

9、劑的量PCV為紅細(xì)胞壓積，單位為%,Pre-Analytical Variables,? 離心 正確為獲得乏血小板血漿(PLT < 10,000/mL)：常溫狀態(tài)下，離心力 1500 g 至少離心 15分鐘。 新鮮樣本，PLT大于200,000/mL，PT/INR, APTT 和 TT不受影響。 Carroll WE, Wollitzer AO, Harris L et al. The sign

10、ificance of platelet count in coagulation studies. J Med.2001;32;83-96水平式轉(zhuǎn)子離心機(jī)，不能使用剎車,分析前變異,? 離心錯誤血小板濃度高會引起LA假陰性血小板的存在是對肝素治療的監(jiān)測產(chǎn)生干擾 Þ Platelet factor 4 (PF4) 中和肝素導(dǎo)致APTT不延長,分析前變異,? 運(yùn)輸和儲存錯誤試管不閉蓋 = CO2丟失=

11、pH升高 = PT 和 APTT延長,分析前變異,? 運(yùn)輸和儲存錯誤溫度過高 = FV 和 FVIII 降解 = PT 和 APTT延長.溫度過低 (2- 4oC) = 冷激活 FVII = PT 縮短，尤其是沒有硅化處理的枸櫞酸鈉試管,分析前變異,? 檢測時間和保存溫度.,TT、PC、因子V、因子VIII等自血液樣本采集之時起，4小時內(nèi)必須完成離心和檢測,分析前變異,? 運(yùn)輸和保存 如果不能在規(guī)定的時間內(nèi)運(yùn)輸?shù)?/p>

12、達(dá)目的地，必須離心分離血漿并且冰凍保存-20oC 2 周以上-70oC 6 月以上 不要使用無霜冰箱冰凍血漿許 37oC 快速復(fù)溶，立即檢測.樣本檢測前在 4oC 最多放 2 小時,其他分析誤差來源,試劑相關(guān)的問題分析儀器,,溶解處理,,狀態(tài)機(jī)械維護(hù)保養(yǎng),試劑,分析儀器,嚴(yán)格按照說明書要求做,試劑相關(guān)問題,,有效期? 儲存條件穩(wěn)定性,,,,,,水的質(zhì)量溶解程序有效期?,,,,,溶解,處理,,試劑相關(guān)

13、問題,? 水質(zhì) I 級水：用于檢測試劑，要求干擾最小 II 級水：用于常規(guī)檢測方法 III級水：用于沖洗玻璃器皿,NS: 沒有特別要求.,活性炭或蒸餾或反滲透,Type I,Type II,Type III,10,1000,NS,NS,NS,5.0–8.0,10 (inline),1.0,0.1,0.05,0.1,1.0,0.22-μm filter,NS,NS,NS,NS,最大微生物量 (CFU/mL),pH,最小電阻 (M

14、W/cm),最大硅酸鹽濃度 (mg/L),顆粒物質(zhì),有機(jī)污染物,,,,,,,,,,,NCCLS Document C3-A3. 1997,? 水質(zhì)NCCLS 指南推薦I級水用于凝血試驗.試劑要求使用雙蒸水.使用商業(yè)化的水，無需檢查電阻，微生物數(shù)量等.高pH會凝固試驗時間延長.混濁的水表示有污染或存在鈣離子.,試劑相關(guān)問題,試劑相關(guān)問題,? 溶解程序 不正確的溶解比例或量污染常常是誤差的來源 1)

15、移液管，加樣槍頭等 2) 被污染的水 Þ 水里含有防腐劑或微生物或抗生素等. 3) 使用不干凈的容器或攪拌棒 4) 殘留的清潔液,試劑相關(guān)問題,? 溶解后的儲存注意試劑和質(zhì)控的有效期，在效期內(nèi)使用. 參考說明書 溶解后的穩(wěn)定性和保存溫度不用的時候閉蓋2-8°C保存。,嚴(yán)格按照說明書操作儀器.,,分析儀器誤差,,吸樣和分配 混

16、勻 溫度光路,,,,日常維護(hù)其他維護(hù),,,機(jī)械方面,Maintenance,分析儀器誤差,? 吸樣和分配樣本和試劑量不準(zhǔn)確不精密 1) 針或管路有氣泡 2) 針外壁臟 3) 堵針 4) 樣本或試劑的注射器單元故障 5) 針的未知錯誤,,重復(fù)性差 凝固時間延長 不凝固,分析儀器誤差,? 儀器故障儀器故障或檢測程序錯誤 1) 混勻功能減弱

17、 2) 孵育時間激活時間不正確 3) 溫度異常 4) 試劑飛濺污染 5) 電磁干擾,重復(fù)性差 結(jié)果不準(zhǔn)確,,分析儀器誤差,找到問題修理故障，采用備用的儀器或方法確認(rèn)檢查測試程序 (test protocol)重新分析手工分析或其他方法 獲得準(zhǔn)確的結(jié)果每天執(zhí)行維護(hù)保養(yǎng)，尤其是采用廠家推薦的清潔液洗針 每天執(zhí)行質(zhì)控,結(jié)論,分析前的因素是誤差的主要來源應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序和教育機(jī)制，控制好