腫瘤免疫治療思考和對(duì)策

1、蘇州大學(xué) 張學(xué)光,腫瘤免疫治療：思考和對(duì)策,腫瘤免疫治療,主要通過相關(guān)的技術(shù)方法增強(qiáng)腫瘤抗原的免疫原性，進(jìn)而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生腫瘤特異性的細(xì)胞免疫應(yīng)答來消除腫瘤。腫瘤相關(guān)及特異性抗原的存在是腫瘤免疫治療的基礎(chǔ)，但因受到腫瘤細(xì)胞本身及外在多種因素的影響，怎樣誘導(dǎo)有效的腫瘤免疫應(yīng)答，是一個(gè)令人困擾的問題。,1.非特異性主動(dòng)免疫療法 非特異性刺激因子 細(xì)胞因子2.特異性主動(dòng)免疫療法 腫瘤疫苗： 包括處理的瘤細(xì)胞

2、、腫瘤抗原肽和人工 合成肽抗原作為疫苗、癌基因產(chǎn)物。 腫瘤抗原特異性DC疫苗,腫瘤的主動(dòng)免疫治療,1、過繼性細(xì)胞免疫治療 LAK、TIL、CTL2、腫瘤的抗體導(dǎo)向治療 抗體偶聯(lián)物 雙特異性抗體3、特異性免疫治療 分子疫苗 腫瘤抗原特異性CTL細(xì)胞治療,腫瘤的被動(dòng)免疫治療,影響宿主腫瘤免疫的因素,腫瘤細(xì)胞低表達(dá)MHC分子腫瘤細(xì)胞缺乏共刺激分子腫瘤抗原是沉默抗原或?yàn)榈兔庖咴阅[瘤抗原

3、特異性CD4+T細(xì)胞克隆丟失腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量抑制因子腫瘤細(xì)胞增殖超過免疫細(xì)胞對(duì)其殺傷能力,,,,,,,,第一信號(hào),MHCⅠ,MHCⅡ,TCR,CD4+T,共刺激分子CD28,共刺激分子B7,腫瘤抗原,第二信號(hào),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,第一信號(hào),MHCⅠ,TCR,CD4+T,共刺激分子CD28,共刺激分子（沉默型/低免疫原）B7,腫瘤抗原,第二信號(hào),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,MHCⅡ,

4、,,,,,激發(fā)有效T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ),腫瘤抗原多肽必需經(jīng)過抗原遞呈細(xì)胞（APC）加工處理后，形成MHC分子復(fù)合物，才能被TCR識(shí)別，產(chǎn)生抗原特異性激發(fā)信號(hào)；還需依賴于APC表達(dá)的共刺激分子與T細(xì)胞上表達(dá)的相應(yīng)分子結(jié)合后產(chǎn)生的共刺激信號(hào)。,一、樹突狀細(xì)胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用,,樹突狀細(xì)胞（DC）是機(jī)體內(nèi)最重要的一群抗原提呈細(xì)胞，是機(jī)體免疫應(yīng)答的有力啟動(dòng)者，以DC為物質(zhì)基礎(chǔ)的免疫療法是近年來新發(fā)展起來的一種新的生物治療手段。

5、,DC激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個(gè)環(huán)節(jié),1. 腫瘤特異性抗原的遞呈；2. 腫瘤特異性CTL細(xì)胞和非特異性殺傷細(xì)胞的活化；3. 效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制因素的識(shí)別。主要目的是誘導(dǎo)患者機(jī)體產(chǎn)生腫瘤特異性的、持久的免疫應(yīng)答。,主要治療策略,（1）直接輸注DCs，以激發(fā)機(jī)體免疫功能的主動(dòng)免疫；（2）以經(jīng)自體DCs體外擴(kuò)增、激活的T淋巴細(xì)胞（CTL）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過繼免疫療法，使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗腫瘤免疫效應(yīng)。,3.

6、DC體外擴(kuò)增的方法,DC 在組織中含量甚微，細(xì)胞表面缺乏特征性的標(biāo)志，不易與其它細(xì)胞分離。細(xì)胞來源的困難一度限制了對(duì)DC生物學(xué)特性等方面的深入研究。 在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)治療時(shí)使用的DC可能并不完全成熟，相當(dāng)一部分回輸?shù)腄C是非功能性的幼稚DC，從而大大降低了治療效果；而如果僅僅應(yīng)用未成熟的DC往往只能導(dǎo)致機(jī)體的免疫耐受。 國內(nèi)外許多實(shí)驗(yàn)室都致力于研究通過體外培養(yǎng)獲得大量高純度功能性成熟DC的方法,,,目前用于臨床和實(shí)

7、驗(yàn)研究的DC 大多是通過體外分離DC的前體細(xì)胞，在含有有關(guān)細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系中誘導(dǎo)獲得。骨髓、臍血、外周血CD34+細(xì)胞或外周血單個(gè)核細(xì)胞均可作為體外培養(yǎng)DC的來源。適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子配伍和應(yīng)用順序?qū)C的培養(yǎng)具有重要作用。,腫瘤抗原特異性DCs的制備,細(xì)胞性腫瘤抗原體外沖擊DC：包括采用滅活的腫瘤細(xì)胞或凋亡的腫瘤細(xì)胞負(fù)載DC; 合成的腫瘤細(xì)胞抗原或抗原肽體外沖擊DC;腫瘤抗原提取物負(fù)載DC：目前常用的提取物包括腫瘤細(xì)胞碎片、酸性洗

8、脫肽及mRNA抽提物; 基因修飾的DC：包括腫瘤抗原編碼的基因及某些細(xì)胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通過病毒導(dǎo)入DC。,二、細(xì)胞毒性T細(xì)胞在腫瘤免疫中的運(yùn)用,,CTL抗凋亡能力測(cè)定 FLIP、Bcl-2、Bax51Cr釋放試驗(yàn) 對(duì)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用 對(duì)自體PBMC的殺傷作用T細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn),A．病人選擇,①  已經(jīng)病理組織學(xué)確診為非小細(xì)胞

9、肺癌②  已失去手術(shù)機(jī)會(huì)或不愿接受手術(shù)治療③  住院病人④  臨床分期（TNM）：Ⅲ期及Ⅲ期以上 ⑤  年齡≤65歲⑥  預(yù)計(jì)生存期≥1.0年⑦  生存質(zhì)量評(píng)分≥60分⑧  心、肝、腎等臟器功能基本正常⑨  知情同意的志愿受試者,B．腫瘤治療,a）將病人隨機(jī)分為A、B、C三組，A組：對(duì)照組，行常規(guī)的正規(guī)放療或化療；B組：試驗(yàn)組，正規(guī)化療

10、+腫瘤抗原特異性自體T細(xì)胞過繼免疫治療；C組：試驗(yàn)組，正規(guī)放療+腫瘤抗原特異性自體T細(xì)胞過繼免疫治療；b) 腫瘤抗原特異性CTL輸注程序：在減瘤治療后，分3次回輸體外擴(kuò)增的自體T淋巴細(xì)胞（1×109/次），即在最大程度降低機(jī)體的腫瘤負(fù)荷后，重建患者的細(xì)胞免疫功能。,C．療效評(píng)價(jià),a)    二個(gè)療程后，按WHO的判定標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)定療效l     

11、  CR（完全緩解）l       PR（部分緩解）l       MR（穩(wěn)定）l       NC或PD（無變化或進(jìn)展）b)    生存質(zhì)量評(píng)分（Karnofsky的標(biāo)準(zhǔn)）根據(jù)腫瘤患者治療前后的精神、睡眠、食

12、欲、疲乏、疼痛、家庭理解與配合、同事的理解與配合、自身對(duì)癌癥的認(rèn)識(shí)、對(duì)治療的態(tài)度、行為狀態(tài)、日?；顒?dòng)情況、面部的表情等進(jìn)行等級(jí)綜合評(píng)分。 c） 臨床癥狀體征改變的分析。 d） 生存期、中位生存期的分析。e） 免疫功能狀況的分析① 采用免疫熒光標(biāo)記法分析患者治療前后的T細(xì)胞及其亞群功能變化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-γ+、CD8+-IF

13、N-γ+、 CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L） ② 采用ELISA法分析患者治療前后的血清細(xì)胞因子水平變化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL-12、IFN-γ）③ 患者治療前后自體T淋巴細(xì)胞對(duì)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)測(cè)定（51Cr釋放試驗(yàn)）④ 肽-MHC四聚體的測(cè)定,三、免疫分子的分析及臨床意義,Dual Parameter Histograms,,,,,,,,,,,,,,,,

14、,,,,,,,,,,1,FSC Size,SSC granularity,,3,2,,Lymphs,Monos,Grans,,,25,抗體的基本結(jié)構(gòu)是一個(gè)Y型的多肽鏈，由兩條完全相同的重鏈和輕鏈組成。,抗體（Antibody,Ab）是血液和組織液中的一類糖蛋白，以γ球蛋白的形式存在血清中，也是B淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答效應(yīng)分子，也被稱之免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）。,雜交瘤技術(shù)的創(chuàng)立