蛋白類藥物生產(chǎn)

1、264蛋白類藥物生產(chǎn)工藝蛋白類藥物生產(chǎn)工藝蛋白質(zhì)類藥物是生化藥物中非?；钴S的一個領(lǐng)域，目前的生化產(chǎn)品主要是從動物臟器或組織包括人的血液中分離而得。20世紀(jì)70年代后，人們開始應(yīng)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)一些蛋白質(zhì)藥物，已實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的產(chǎn)品如胰島素、干擾素、白細(xì)胞介素、生長素、EPO、tPA、TNF等，現(xiàn)正從微生物和動物細(xì)胞的表達(dá)轉(zhuǎn)向基因動植物發(fā)展。第一節(jié)第一節(jié)主要蛋白質(zhì)類藥物的制備主要蛋白質(zhì)類藥物的制備蛋白質(zhì)類藥物主要包括蛋白質(zhì)類激素、蛋白質(zhì)

2、細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子、血漿蛋白質(zhì)類、黏蛋白、膠原蛋白及蛋白酶抑制劑等，其作用方式包括對機體各系統(tǒng)和細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)、被動免疫、替代療法等。一、蛋白質(zhì)激素類蛋白質(zhì)類激素主要包括垂體蛋白質(zhì)激素、促性腺激素和其他蛋白質(zhì)激素。其中垂體蛋白質(zhì)激素包括生長素(GH)、催乳激素(PRL)、促甲狀腺素(TSH)、促卵泡激素(FSH)等。促性腺激素包括人絨毛膜促性腺激素(HCG)、血清促性腺激素(SGH)等。其他蛋白質(zhì)激素包括胰島素、胰抗脂肝素、尿抑胃素等。(

3、一)生長素(growthhmone，GH)生長素是動物腦垂體前葉外側(cè)的特異分泌細(xì)胞分泌的一種促進(jìn)生長的蛋白質(zhì)激素，具有調(diào)節(jié)生長與發(fā)育的功能，對多種人類疾病有很好的療效。人生長素（humangrowthhmone，hGH）由一條191個氨基酸的多肽構(gòu)成的一鏈多肽的球形蛋白質(zhì)，分子中含兩條二硫鍵，分子量為21700，等電點4.9，沉降系數(shù)S20，W2.179，其活性不需要整個分子結(jié)構(gòu)，N端1～134氨基酸為活性所必需，C端的肽鏈起到保護(hù)作用

4、，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與催乳素近似，故生長素有弱催乳素作用，而催乳素有弱生長素作用。生長素包含大小兩個環(huán)，以親水球蛋白的形式存在。不同種類動物的生長素，其化學(xué)Comment[園園園園1]:對所有的圖，在圖的圖題后添加（引自xxx200x）266電點沉淀以除去雜蛋白，離心、取上清液。⑨鹽析調(diào)上清液pH為4.0，加飽和硫酸銨溶液至濃度為1.25mol／L鹽析，離心，得沉淀物。⑩除鹽將沉淀物溶于少量蒸餾水中，對含0.1mol／L氯化鈉的TrisHCL(

5、pH8.5)緩沖溶液進(jìn)行透析，得透析內(nèi)液。⑩凝膠過濾透析內(nèi)液上SephadesG75凝膠柱，用含0.1mol／L氯化鈉的50mmol／LTrisHCL(pH8.5)緩沖溶液進(jìn)行洗脫，分步收集，活性GH存在于第Ⅱ峰中。⑩透析將活性峰部分對6.5mmol／L的硼砂鹽酸(pH8.7)緩沖溶液進(jìn)行透析，得透析內(nèi)液。⑩層析將透析內(nèi)液上DEAEC(DE52)柱，用含0～0.3mol／L氯化鈉的6.5mmol／L硼砂鹽酸(pH8.0)緩沖溶液進(jìn)行梯度

6、洗脫，合并活性峰，脫鹽，凍干得GH。2人生長素的基因工程法人生長素的基因工程法hGH的種屬特異性很強，動物生長激素不能用于人，所以開始時hGH的惟一來源是從人尸體的腦垂體中取得，來源困難，價格昂貴，應(yīng)用受到限制。目前已利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)出hGH，美國的Genentech公司利用枯草桿菌系統(tǒng)表達(dá)的hGH產(chǎn)量高達(dá)1.5gL，這也是第一代重組人生長激素，商品名稱為Protropin.生產(chǎn)路線如圖112所示。發(fā)酵培養(yǎng)種子培養(yǎng)離心G25色譜Ph