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文檔簡介
1、DNA的粗提取與鑒定【課前復(fù)習】在實驗前如果先來回顧細胞的結(jié)構(gòu)、DNA存在的部位、染色質(zhì)的主要成分、滲透作用的原理、生物組織中有機化合物鑒定的方法等知識,既有利于掌握新知識,又便于將新知識納入知識網(wǎng)絡(luò)中。溫故——會做了,學習新課才能有保障1用蛋白酶對細胞核中能被堿性染料染色的物質(zhì)進行處理,得到了一些細絲,這些絲狀物可能是A蛋白質(zhì)BDNACRNAD脫氧核苷酸解析:細胞核中被堿性染料染色的物質(zhì)應(yīng)是染色質(zhì)或染色體,染色質(zhì)的化學成分為蛋白質(zhì)和D
2、NA,用蛋白酶處理,因為酶的專一性,只會分解蛋白質(zhì)而不會對DNA有分解作用,所以保留下來的應(yīng)該是DNA絲。答案:B2人的紅細胞的壽命較短,這一事實體現(xiàn)了A環(huán)境因素的影響B(tài)功能對壽命的決定C核質(zhì)相互依存的關(guān)系D遺傳因素的作用解析:因為人和哺乳動物成熟的紅細胞沒有核,所以壽命較短,反映了核質(zhì)之間的相互依存的關(guān)系。答案:C3真核細胞是由_____________、_____________、_____________構(gòu)成,細胞核又包括____
3、_________、_____________、_____________、_____________(染色體),染色質(zhì)主要由____________組成。答案:細胞膜細胞質(zhì)細胞核核膜核液核仁染色質(zhì)DNA和蛋白質(zhì)4做“生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實驗”時,要根據(jù)實驗需要選擇不同的實驗材料。請根據(jù)下表所列各種材料回答問題:各種可供實驗的材料梨黃桃胡蘿卜黃豆花生種子小麥種子①其中適合于鑒定糖的是_____________,理由
4、是_________________________,鑒定試劑用____________。②小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪,這是因為_____________________,你怎樣進行鑒定?_____________________。③適合于鑒定蛋白質(zhì)的是____________,理由是_____________,鑒定所用的試劑是____________。解析:用特定的顏色反應(yīng)來鑒定生物組織中的各成分首先要考慮到取材,選取的材
5、料應(yīng)是該成分含量相對較多,并且顏色盡量淺淡或無色,以減少對實驗效果的影響;其次要考慮提取的方法;第三要知道鑒定的方法。答案:①梨梨的組織細胞顏色為白色,并且糖含量較高斐林試劑②小麥種子的脂肪含量不如花生種子高,也不容易做切片用蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ試劑鑒定③黃豆和花生蛋白質(zhì)含量高雙縮脲試劑知新——先看書,再來做一做填充題:1使溶解在NaCl溶液中的DNA析出的原理是_________________________。2實驗中提取含雜質(zhì)較少的DN
6、A的原理是__________________________。3實驗中用作鑒定DNA的試劑是____________;原理是__________________________。4實驗的方法步驟是:制備雞血細胞液→提取____________→溶解____________→析出_____________→溶解_____________→析出2實驗材料雞血細胞液:先配備10%的檸檬酸鈉溶液,按180mL新鮮雞血混合100mL10%檸檬酸
7、鈉溶液的比例,立即將血液與檸檬酸鈉充分混合,同時用玻璃棒攪拌以免凝血。然后,用離心機以1000轉(zhuǎn)/min的速度離心2min后,用吸管除去離心管上清液,就可獲得所需的雞血細胞懸液。每組大約需要5~10mL雞血細胞懸液。如果無離心機,可將與檸檬酸鈉充分混合的血液置于冰箱內(nèi),靜置一天,使血細胞自行沉淀后,也可獲得所需的雞血細胞懸液。但使用離心機效果更好。3試劑與儀器(1)2molL的NaCl溶液:稱取117g的NaCl,加蒸餾水至1000mL
8、,使之完全溶解,即可獲得2molL的NaCl,須按此配方配備大量的2molL的NaCl。(2)二苯胺試劑:A液—1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加1.5mL濃硫酸,用棕色瓶保存。B液—體積分數(shù)為0.2%的乙醛溶液。實驗前,將0.1mL的B液加入到10mL的A液中,現(xiàn)用現(xiàn)配。(3)0.015molL的NaCl溶液:稱取0.88gNaCl加蒸餾水至1000mL,使之完全溶解。(4)塑料杯和試管:DNA易吸附在玻璃器皿上,用塑料杯和試
9、管可減少提取過程中DNA的損失。4實驗方法與步驟為方便理解和記憶,將方法步驟歸納如下表。實驗內(nèi)容方法步驟原理(1)提取細胞核物質(zhì):取5~10mL雞血細胞懸液注入50mL燒杯中,加蒸餾水20mL,同時,用玻璃棒沿一個方向快速充分攪拌,使血細胞過度吸水破裂,細胞核內(nèi)物質(zhì)釋放出來,然后用紗布過濾取其濾液于500mL燒杯中(2)溶解核內(nèi)的DNA:在濾液中加入2mol/L的NaCl40mL,并用玻璃棒沿一個方向攪拌1min,核中DNA游離并充分溶
10、解,染色質(zhì)中的DNA和蛋白質(zhì)分離(3)析出含DNA黏稠物:沿燒杯內(nèi)壁緩慢加入蒸餾水,同時用玻璃棒沿一個方向不停地輕輕攪拌。由于溶液濃度的下降,使得DNA溶解度下降,蛋白質(zhì)溶解度上升,DNA析出成白色絲狀黏稠物,當黏稠物不再增加時,停止加入蒸餾水。(這時溶液中NaCl的物質(zhì)的量濃度相當于0.14mol/L)一、提取DNA(4)濾取含DNA黏稠物:用多層紗布過濾,取紗布上DNA的黏稠物(5)DNA黏稠物再溶解:取含DNA黏稠物于50mL燒杯
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