fish檢測

1、FISHFISH檢測檢測HER2HER2的意義的意義乳腺癌有效的治療取決于正確的選擇治療方案，腫瘤專家研究發(fā)現(xiàn)HER2的水平是以阿霉素為基礎(chǔ)藥物化療重要而獨(dú)立的預(yù)后因子。HER2水平的檢測被認(rèn)為是選擇乳腺癌化療的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。HER2水平的檢測對乳腺癌治療具有指導(dǎo)性意義。不準(zhǔn)確的結(jié)果會(huì)造成不正確的治療方案。導(dǎo)致病人遭受不必要的化療或者使病人喪失有效的治療良機(jī)。HER2neu也稱作CerbB2，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長中起著重要的作用，是分子量為18

2、5kd的轉(zhuǎn)膜細(xì)胞受體，屬于酪氨酸酶家族的成員。HER2被證實(shí)在乳腺癌、卵巢癌和其它腫瘤上擴(kuò)增和過表達(dá)。其擴(kuò)增和過表達(dá)被認(rèn)為是乳腺癌最重要預(yù)后和化療標(biāo)記。大約有25%30%乳腺癌有HER2基因擴(kuò)增。化療是乳腺癌術(shù)后最重要的治療方法之一，患者腫瘤HER2擴(kuò)增對以阿霉素為基礎(chǔ)化療的敏感性好，研究表明，HER2擴(kuò)增的病人實(shí)施強(qiáng)化劑量的化療后其生存率明顯提高。而對無HER2擴(kuò)增的病人沒有那么好的效果。所以對無HER2擴(kuò)增的病人沒有必要執(zhí)行這樣的化

3、療。準(zhǔn)確的HER2水平檢測為正確選擇治療方案提供重要依據(jù)。目前用于治療乳腺癌的單克隆抗體Herceptin理論上只對細(xì)胞膜上過多HER2蛋白表達(dá)的細(xì)胞才有作用，所以Herceptin治療需要篩選HER2陽性的患者才有可能成功。目前檢測HER2基因擴(kuò)增或HER2蛋白過度表達(dá)的方法有許多種，有南方點(diǎn)墨法、西方點(diǎn)墨法、北方點(diǎn)墨法、免疫組織化學(xué)染色法（IHC）和熒光原位雜交法（fluescenceinsituhybridizationFISH）

4、等。目前DAKOHerceptintest，VysisPathVysionHER2DNAProbe試劑盒和OncINFMHER2neu已通過美國食品藥物管理局（FDA）的認(rèn)證，目前被認(rèn)為是比較可靠的方法。IHC和FISH均可以使用福爾馬林固定的組織蠟塊來檢測，和一般病理組織標(biāo)本處理相同，病理存檔的組織塊也能用于HER2的檢測，因此目前實(shí)驗(yàn)室多數(shù)使用IHC和FISH來檢測HER2。Herceptintest和FISH相比Herceptin

5、test操作時(shí)間比較短，大約46個(gè)小時(shí)即可完成，而FISH需要隔夜完成。使用的設(shè)備Herceptintest只需要一般光學(xué)顯微鏡，F(xiàn)ISH則需要使用熒光顯微鏡。從分子生物學(xué)原理上講FISH檢測的是腫瘤細(xì)胞的DNA，而Herceptintest（免疫化學(xué)法）檢測的是細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)。實(shí)際上真正執(zhí)行基因功能的物質(zhì)是蛋白質(zhì)而不是DNA，這要看HER2基因是否擴(kuò)增，當(dāng)然以觀察細(xì)胞膜表面HER2蛋白質(zhì)的量是否增加最為直接。也最為可信。因?yàn)橛袝r(shí)即

6、使DNA有擴(kuò)增其結(jié)果未必能在蛋白質(zhì)曾面表現(xiàn)出來。因?yàn)橛蒁AN有表現(xiàn)到蛋白質(zhì)被制造出來必須經(jīng)過很多程序，中間可能出現(xiàn)很多干擾因素。除此之外，免疫化學(xué)檢測法比較便宜，省時(shí)，可以較普遍的篩選。FISH的優(yōu)點(diǎn)在于使用傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法檢測腫瘤組織的DNA。FISH在熒光顯微鏡下可以確認(rèn)出腫瘤所在的位置，以VysisPathVysionHER2DNAProbe來說，它會(huì)把HER2基因部位橘色熒光亮點(diǎn)，還將第17對染色體的中心顆粒（centrome

7、re）呈現(xiàn)綠色亮點(diǎn)，我們只要對比橘色和綠色亮點(diǎn)的數(shù)目，若橘色點(diǎn)綠色點(diǎn)大于2，就表示有HER2擴(kuò)增，正常細(xì)胞橘色點(diǎn)綠色點(diǎn)數(shù)目比值小于2。FISH同IHCHER2水平檢測方法相比，IHC檢測的準(zhǔn)確性不如原位雜交（CISH）和原位熒光雜交法（FISH）。就各種檢測方法比較FISH為最好，F(xiàn)ISH檢測的結(jié)果可靠，被喻為HER2水平檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。HER2免疫組織化學(xué)2的意思是腫瘤組織在免疫組織化學(xué)染色下著色強(qiáng)度為2價(jià)。多數(shù)認(rèn)為HER23（3價(jià)）具

8、有臨床意義，可以作為使用Herceptin治療的依據(jù)。her2IHC2則必須加作FISH檢測是否真的有HER2擴(kuò)增。而HER2IHC0或1則表示沒有沒有需要的材料但Vysis公司不提供實(shí)驗(yàn)室試劑HER2nue探針檢測正常對照（正常信號(hào)率）derNo.30805093福爾馬林固定，石蠟包埋，培養(yǎng)好的人細(xì)胞株（nmalLSIHER2nueCEP17ratio）應(yīng)用型顯微鏡載玻片數(shù)量：5片，對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。HER

9、2nue探針界限對照片（弱擴(kuò)增信號(hào)率）derNo.30805042；福爾馬林固定，石蠟包埋。培養(yǎng)好的人細(xì)胞株（低水平HER2nue擴(kuò)增）應(yīng)用型顯微鏡載玻片數(shù)量：5片，對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。石蠟預(yù)處理試劑盒（Vysiscat.﹟32801200）盒內(nèi)包括：預(yù)處理液（NN）數(shù)量：5X50mL蛋白酶（胃蛋白酶25003000單位mg）數(shù)量：5X25mg蛋白酶緩沖液（NaClsolutionpH2）數(shù)量：5X50Ml緩沖

10、洗液（2XSSC，pH7）數(shù)量：2X250mL中性緩沖福爾馬林液（4%多聚甲醛PBS配制）HemoDe(血液德)透明劑（FisherproductNo.15182507A）蘇木精和伊紅（H&E）適當(dāng)?shù)臒晒怙@微鏡浸泡油。室溫貯存超純甲酰胺。從發(fā)貨計(jì)算4℃保存1個(gè)月（查看生產(chǎn)商推薦的詳細(xì)信息）100%乙醇。室溫貯存濃縮的（12N）鹽酸1N氫氧化鈉純凈水（蒸餾水或去離子水或MilliQ）。室溫貯存橡膠水泥膠Drierite德里拉特[干燥用無水