fish檢測

1、FISHFISH檢測檢測HER2HER2的意義的意義乳腺癌有效的治療取決于正確的選擇治療方案，腫瘤專家研究發(fā)現(xiàn)HER2的水平是以阿霉素為基礎(chǔ)藥物化療重要而獨立的預(yù)后因子。HER2水平的檢測被認為是選擇乳腺癌化療的標準依據(jù)。HER2水平的檢測對乳腺癌治療具有指導(dǎo)性意義。不準確的結(jié)果會造成不正確的治療方案。導(dǎo)致病人遭受不必要的化療或者使病人喪失有效的治療良機。HER2neu也稱作CerbB2，在調(diào)節(jié)細胞的生長中起著重要的作用，是分子量為18

2、5kd的轉(zhuǎn)膜細胞受體，屬于酪氨酸酶家族的成員。HER2被證實在乳腺癌、卵巢癌和其它腫瘤上擴增和過表達。其擴增和過表達被認為是乳腺癌最重要預(yù)后和化療標記。大約有25%30%乳腺癌有HER2基因擴增?；熓侨橄侔┬g(shù)后最重要的治療方法之一，患者腫瘤HER2擴增對以阿霉素為基礎(chǔ)化療的敏感性好，研究表明，HER2擴增的病人實施強化劑量的化療后其生存率明顯提高。而對無HER2擴增的病人沒有那么好的效果。所以對無HER2擴增的病人沒有必要執(zhí)行這樣的化

3、療。準確的HER2水平檢測為正確選擇治療方案提供重要依據(jù)。目前用于治療乳腺癌的單克隆抗體Herceptin理論上只對細胞膜上過多HER2蛋白表達的細胞才有作用，所以Herceptin治療需要篩選HER2陽性的患者才有可能成功。目前檢測HER2基因擴增或HER2蛋白過度表達的方法有許多種，有南方點墨法、西方點墨法、北方點墨法、免疫組織化學(xué)染色法（IHC）和熒光原位雜交法（fluescenceinsituhybridizationFISH）

4、等。目前DAKOHerceptintest，VysisPathVysionHER2DNAProbe試劑盒和OncINFMHER2neu已通過美國食品藥物管理局（FDA）的認證，目前被認為是比較可靠的方法。IHC和FISH均可以使用福爾馬林固定的組織蠟塊來檢測，和一般病理組織標本處理相同，病理存檔的組織塊也能用于HER2的檢測，因此目前實驗室多數(shù)使用IHC和FISH來檢測HER2。Herceptintest和FISH相比Herceptin

5、test操作時間比較短，大約46個小時即可完成，而FISH需要隔夜完成。使用的設(shè)備Herceptintest只需要一般光學(xué)顯微鏡，F(xiàn)ISH則需要使用熒光顯微鏡。從分子生物學(xué)原理上講FISH檢測的是腫瘤細胞的DNA，而Herceptintest（免疫化學(xué)法）檢測的是細胞膜表面的蛋白質(zhì)。實際上真正執(zhí)行基因功能的物質(zhì)是蛋白質(zhì)而不是DNA，這要看HER2基因是否擴增，當(dāng)然以觀察細胞膜表面HER2蛋白質(zhì)的量是否增加最為直接。也最為可信。因為有時即

6、使DNA有擴增其結(jié)果未必能在蛋白質(zhì)曾面表現(xiàn)出來。因為由DAN有表現(xiàn)到蛋白質(zhì)被制造出來必須經(jīng)過很多程序，中間可能出現(xiàn)很多干擾因素。除此之外，免疫化學(xué)檢測法比較便宜，省時，可以較普遍的篩選。FISH的優(yōu)點在于使用傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法檢測腫瘤組織的DNA。FISH在熒光顯微鏡下可以確認出腫瘤所在的位置，以VysisPathVysionHER2DNAProbe來說，它會把HER2基因部位橘色熒光亮點，還將第17對染色體的中心顆粒（centrome

7、re）呈現(xiàn)綠色亮點，我們只要對比橘色和綠色亮點的數(shù)目，若橘色點綠色點大于2，就表示有HER2擴增，正常細胞橘色點綠色點數(shù)目比值小于2。FISH同IHCHER2水平檢測方法相比，IHC檢測的準確性不如原位雜交（CISH）和原位熒光雜交法（FISH）。就各種檢測方法比較FISH為最好，F(xiàn)ISH檢測的結(jié)果可靠，被喻為HER2水平檢測的金標準。HER2免疫組織化學(xué)2的意思是腫瘤組織在免疫組織化學(xué)染色下著色強度為2價。多數(shù)認為HER23（3價）具

8、有臨床意義，可以作為使用Herceptin治療的依據(jù)。her2IHC2則必須加作FISH檢測是否真的有HER2擴增。而HER2IHC0或1則表示沒有沒有需要的材料但Vysis公司不提供實驗室試劑HER2nue探針檢測正常對照（正常信號率）derNo.30805093福爾馬林固定，石蠟包埋，培養(yǎng)好的人細胞株（nmalLSIHER2nueCEP17ratio）應(yīng)用型顯微鏡載玻片數(shù)量：5片，對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。HER

9、2nue探針界限對照片（弱擴增信號率）derNo.30805042；福爾馬林固定，石蠟包埋。培養(yǎng)好的人細胞株（低水平HER2nue擴增）應(yīng)用型顯微鏡載玻片數(shù)量：5片，對照片在1530℃干燥劑防潮密封在容器中貯存。石蠟預(yù)處理試劑盒（Vysiscat.﹟32801200）盒內(nèi)包括：預(yù)處理液（NN）數(shù)量：5X50mL蛋白酶（胃蛋白酶25003000單位mg）數(shù)量：5X25mg蛋白酶緩沖液（NaClsolutionpH2）數(shù)量：5X50Ml緩沖

10、洗液（2XSSC，pH7）數(shù)量：2X250mL中性緩沖福爾馬林液（4%多聚甲醛PBS配制）HemoDe(血液德)透明劑（FisherproductNo.15182507A）蘇木精和伊紅（H&E）適當(dāng)?shù)臒晒怙@微鏡浸泡油。室溫貯存超純甲酰胺。從發(fā)貨計算4℃保存1個月（查看生產(chǎn)商推薦的詳細信息）100%乙醇。室溫貯存濃縮的（12N）鹽酸1N氫氧化鈉純凈水（蒸餾水或去離子水或MilliQ）。室溫貯存橡膠水泥膠Drierite德里拉特[干燥用無水