基因工程總復(fù)習(xí)

1、第一章第一章1.基因工程：基因工程：利用DNA重組技術(shù)，將目的基因與載體DNA在體外進(jìn)行重組，然后把這種重組DNA分子引入受體細(xì)胞，并使之增殖和表達(dá)的技術(shù)2基因克?。夯蚩寺。涸诜肿由飳W(xué)上，人們把將外源DNA插入具有復(fù)制能力的載體DNA中，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞使這得以永久保存和復(fù)制的過程稱為基因克隆。（基因工程或重組DNA技術(shù)則側(cè)重于驗(yàn)證上述過程所獲得遺傳物質(zhì)新組合在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與功能鑒定）3.3.重組重組DNADNA技術(shù)技術(shù)（Recom

2、binantDNATechnique）是人類根據(jù)需要選擇目的基因（DNA片段）在體外與基因運(yùn)載體重組，轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞或生物體內(nèi)，以達(dá)到改良和創(chuàng)造新的物種和治療人類疾病的目的。4.4.基因操作：基因操作：對(duì)生物體的遺傳物質(zhì)進(jìn)行人為的操作，使之發(fā)生修飾和改變的過程。簡(jiǎn)答簡(jiǎn)答說明基因工程的理論基石和技術(shù)基礎(chǔ)說明基因工程的理論基石和技術(shù)基礎(chǔ)理論基石（三大發(fā)現(xiàn)）：DNA是遺傳信息的載體；DNA的雙螺旋機(jī)構(gòu)模型及其半保留復(fù)制機(jī)理；中心法則和遺傳密碼

3、及其通用性。技術(shù)基礎(chǔ)（三大發(fā)明）：DNA的體外切割和連接；載體和宿主的發(fā)現(xiàn)、改造和利用；DNA測(cè)序、電泳分離和分子雜交（Southern、Nthern和WestBlot）簡(jiǎn)述基因工程研究的主要內(nèi)容簡(jiǎn)述基因工程研究的主要內(nèi)容1）克隆載體的研發(fā)2）受體系統(tǒng)的研發(fā)3）目的基因研究4）工具酶5）新技術(shù)研究（基因槍、放射性同位素探針、PCR等）簡(jiǎn)述基因工程的主要應(yīng)用領(lǐng)域簡(jiǎn)述基因工程的主要應(yīng)用領(lǐng)域1）基因工程藥物（重組活性多肽或蛋白、疫苗和DNA疫

4、苗等）2）轉(zhuǎn)基因作物（抗病、抗蟲、抗除草劑、抗逆及生物反應(yīng)器等）3）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（乳腺生物反應(yīng)器）4）工業(yè)（纖維素酶、釀造業(yè)菌株、抗菌素生產(chǎn)菌株的工程改造，等）5）環(huán)保（生物降解塑料原料基因工程和生物防治農(nóng)藥污染基因工程等）用5個(gè)詞描述基因工程的過程。個(gè)詞描述基因工程的過程。（找、剪、連、轉(zhuǎn)、選）第二章第二章天然天然DNADNA的制備的制備DNADNA變性變性：是指雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，形成單鏈無規(guī)線團(tuán)狀態(tài)的過程。DNADNA復(fù)

5、性：復(fù)性：變性的DNA的互補(bǔ)鏈在適當(dāng)條件下重新締合成雙螺旋的過程稱為DNA的復(fù)性。TmTm值：將紫外吸收的增加量達(dá)最大量的一半時(shí)的溫度值稱為熔解溫度（Tm）簡(jiǎn)述簡(jiǎn)述DNADNA與基因工程有關(guān)的主要特性。與基因工程有關(guān)的主要特性。1）變性：在一定的條件下，DNA雙鏈因鏈間氫鍵破壞而解鏈的過程。如溫度變性，90℃足以使所有的DNA變性；其他如pH、離子強(qiáng)度、脫水劑等。2）復(fù)性：變性DNA分子因鏈間氫鍵恢復(fù)而重新形成雙鏈DNA的過程。若是溫度

6、變性，當(dāng)緩慢降低溫度時(shí)，該過程得以進(jìn)行。以上是PCR反應(yīng)的依據(jù)。3）帶電性：一般pH下，帶負(fù)電荷，可電泳分離。4）水溶解性：DNA屬于生物大分子，且?guī)щ姾?，通常分子外形成水膜，可溶于水；但?dāng)電荷變化（如等電點(diǎn)）或水膜破壞時(shí)，就會(huì)沉淀，這是DNA提取和分離的依據(jù)。1，利用不同的限制性核算內(nèi)切酶切割目的基因的兩端，以形成不同的粘性末端2，在克隆載體的插入位置設(shè)置對(duì)應(yīng)的兩種不同的內(nèi)切酶位點(diǎn)，經(jīng)對(duì)應(yīng)的內(nèi)切酶切割后形成與目的基因互補(bǔ)的粘性末端3，

7、DNA連接酶處理目的基因和克隆載體（克隆載體插入位置上設(shè)置兩個(gè)不同的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，在外源DNA分子兩端也放上相應(yīng)的兩個(gè)限制性酶切序列，經(jīng)限制性酶消化后，所產(chǎn)生的DNA黏性末端分別互補(bǔ)結(jié)合，外源DNA就可定向插入載體。）說明限制性核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生說明限制性核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生StarStar活性的原因及其克服措施。活性的原因及其克服措施。限制酶的限制酶的StarStar活性：活性：在特定條件下，某些酶在非識(shí)別序列處切割DNA的現(xiàn)象稱為Star

8、活性。Star活性因限制酶種類、DNA和反應(yīng)條件的不同而不同，一般是由于一下原因：高濃度酶、高濃度甘油、低離子強(qiáng)度、Mn2取代Mg2或高pH?？朔胧孩贉p少酶的用量，以避免過分酶切②減少甘油濃度③保證反應(yīng)體系中無有機(jī)溶劑或乙醇④提高離子強(qiáng)度到100~150mmolL⑤降低反應(yīng)PH至PH7.0⑥保證使用Mg2作為二價(jià)陽離子等第4、5章分子克隆載體分子克隆載體1.1.載體：載體：能將所承載的外源DNA片段（基因）帶入受體細(xì)胞，并在其中得以

9、維持的DNA分子。2.2.表達(dá)載體：表達(dá)載體：含有強(qiáng)啟動(dòng)子、外源基因可在啟動(dòng)子的控制下轉(zhuǎn)錄成mRNA，并最終以蛋白質(zhì)的形式在宿主細(xì)胞中表達(dá)的載體。3.3.報(bào)告載體報(bào)告載體：一種易于用生化方法檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的基因作為報(bào)告基因，通常由pBasic、pEnhancer、pPromoter、pControl組成的載體。4.4.質(zhì)粒載體：質(zhì)粒載體：以質(zhì)粒DNA分子為基礎(chǔ)構(gòu)建而成的載體，主要用于原核生物和植物的基因轉(zhuǎn)移以及建立基因組文庫(kù)和cDNA基因

10、文庫(kù)。5.5.質(zhì)粒：質(zhì)粒：細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)一種自我復(fù)制的環(huán)狀雙鏈DNA分子，能穩(wěn)定地獨(dú)立存在于染色體外，并傳遞到子代，一般不整合到宿主染色體上。6.cccDNA6.cccDNA：超螺旋共價(jià)閉環(huán)DNA分子7.7.遷移作用：遷移作用：由共存的結(jié)合型質(zhì)粒引發(fā)的非結(jié)合型質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象稱為遷移作用。8.8.接合質(zhì)粒：接合質(zhì)粒：含tra基因的質(zhì)粒，分子較大，拷貝數(shù)較少，宿主廣，不安全，使用時(shí)應(yīng)特別注意（tra基因，指令產(chǎn)生菌毛（pilus），促使宿主與受