柱層析

1、柱色譜Column chromatography,一、實驗要求與目的,1、掌握色譜法的基本原理,2、學(xué)會利用柱色譜分離提純 有機(jī)化合物的規(guī)范操作,二、實驗原理,流動相,1、基本原理： 利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他親和作用的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。,固定相,2、分類：

2、 柱色譜 紙色譜 根據(jù)操作條件分為 薄層色譜 氣相色譜 液相色譜,3

3、、柱色譜（柱層析）（1）在薄層色譜的基礎(chǔ)上，進(jìn)行混合物的分離（2）分類：吸附型（Al2O3、硅膠G等作吸附劑） 分配型（硅藻土、纖維素等作支持劑）（3）吸附柱色譜 1）吸附劑：一般采用表面積很大，經(jīng)過活化的多孔 性或粉狀的固體 氧化鋁（酸性、中性、堿性） a、用前應(yīng)純

4、化并在105-110℃活化0.5h，于烘 箱中自然冷卻 b、采用勃勞克曼（Brockmann）標(biāo)準(zhǔn)測定法進(jìn)行 吸附劑活性等級的測定 c、吸附劑用量 被分離樣品：吸附劑量=1：30-40或100倍,,2）混合溶液1-2ml偶氮苯和蘇丹Ⅲ 的混合液3）洗

5、脫劑：a、溶劑的結(jié)構(gòu)與吸附能力的關(guān)系 化合物的吸附性與它們的極性成正比即極性大 吸附力強(qiáng)，后洗脫 b、洗脫劑的選擇 第一，先極性小的，再極性大的 可以是單一溶劑，也可是混合溶劑

6、 第二，溶劑純度要高并經(jīng)干燥過的4）色譜柱的裝填分為： 干法和濕法兩種 柱高和柱直徑之比=7.5 ：1,三、裝置圖,裝柱,洗脫,四、主要試劑及其物理常數(shù),偶氮苯,蘇丹Ⅲ,中性三氧化二鋁,苯,乙酸乙酯,五、實驗操作步驟,1、裝柱：干法裝填，邊加邊輕敲柱子，注意松緊度2、混合液的加入：用滴管或量筒沿壁加入3、洗脫：先用極性小的溶劑洗脫吸附性小的

7、物質(zhì)，再用極性大的 溶劑洗脫吸附性強(qiáng)的物質(zhì)。始終保持吸附劑頂部有少量 溶劑，加溶劑時勿將吸附劑沖起4、產(chǎn)品收集：分別收集不同顏色的產(chǎn)物及洗脫劑， 并量取和記錄各自的體積,干法裝柱、濕法加樣、梯度洗脫,六、注意,1、吸附劑的選擇和活化2、洗脫劑的選擇：對未知樣品先用極性小的溶劑洗

8、 脫，再用極性大的溶劑洗脫3、裝柱的技術(shù)：松緊度4、吸附劑的用量：5、柱高：柱子太高洗脫慢,問題：,1、 色譜法的基本原理?2 、柱色譜與薄層色譜之間有怎樣的區(qū)別與聯(lián)系3 、如何選擇洗脫溶劑？4 、干法裝柱與濕法裝柱時，應(yīng)該注意哪些問題？5、 色譜柱如何清洗和干燥?6、 色譜柱一般的直徑和高度比例是多少?7 、柱色譜分為幾類?