咳喘康對博萊霉素a5致肺纖維化大鼠肺組織中tgf-β1及其受體mrna表達的影響_徐艷玲

1、表1各組大鼠的定位航行試驗總時間總路程比較組別n總時間(S)總路程(cm)獨活組924.9411.821587.787.3西藥組959.6419.22v3727.320.8vv模型組957.2230.50v3273.514.5vv假手術組935.4724.95v1821.111.3vv注:各實驗組與獨活組比較vP0105各實驗組與獨活組比較vvP0105。性學習包括各類迷宮。本實驗采用的Mris的水迷宮行為學是一種空間記憶的模型與大鼠的

2、學習記憶功能有關較其他方法有其明顯的優(yōu)越性結合特定的迷宮及攝像系統(tǒng)、正確的訓練程序及專用的統(tǒng)計軟件使學習記憶實驗研究的指標觀測系統(tǒng)而全面具有操作簡便、數(shù)據(jù)誤差小的特點近年來常利用這種方法來研究大鼠的學習記憶功能。觀察的指標主要是計算動物找到平臺所需要的時間以及動物游泳的路程。這種水迷宮方法已成為神經科學研究前沿公認的動物學習記憶行為學檢測先進方法。本實驗采用直接向大鼠海馬區(qū)注射凝聚態(tài)AB140方法制作AD的動物模型可較好地模擬老年性癡呆

3、行為學表現(xiàn)可作為AD模型之一[5]。中醫(yī)認為AD的病位在腦與心肝脾腎功能失調密切相關。其性質是本虛標實本虛主要為腎精虧損和氣血不足標實主要表現(xiàn)為淤血阻絡、痰濕阻竅。臟腑功能失調是AD發(fā)病的重要病理基礎瘀血阻絡、痰收稿日期:20080708基金項目:遼寧省教育廳科研課題(05L241)作者簡介:徐艷玲(1957)女遼寧綏中人主任醫(yī)師、教授碩士生導師研究方向:中西醫(yī)結合治療呼吸系統(tǒng)疾病。濕阻竅是AD的重要因素。獨活味辛、苦性微溫歸腎膀胱經。

4、現(xiàn)代中藥學多用其祛風除濕通痹止痛的功效以治風寒濕痹腰膝疼痛少陰伏風頭痛。獨活為常用中藥始載于5神農本草經6列為上品主風寒所擊金瘡止痛奔豚癇疰女子疝瘕久服輕身耐老0?？v觀歷代本草可以看出獨活是一味行氣活血、溫養(yǎng)營衛(wèi)、入陰升陽、通補兼得的抗衰老之良藥。其延緩衰老的機制主要是行氣活血、祛瘀除濕。現(xiàn)代藥理研究表明獨活具有抑制血小板聚集、抗血栓、拮抗鈣通道受體、增強免疫功能、抗關節(jié)炎、鎮(zhèn)痛等作用[6]。故獨活可適用于防治老年性癡呆。本實驗采用Mr

5、is水迷宮檢測獨活對大鼠定位航行學習記憶能力的改善作用。實驗結果表明模型組大鼠在檢測中的所用時間延長、游泳距離明顯增加說明模型組大鼠的學習記憶能力受到嚴重損傷。獨活組大鼠在試驗中的上述兩項檢測指標都明顯優(yōu)于模型組表明獨活對AD模型大鼠的學習記憶能力有明顯改善作用。參考文獻[1]宋葆華.地黃引子對老年癡呆大鼠認知能力的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志200532(6):616.[2]丁正明.老年癡呆動物模型研究進展[J].浙江中西醫(yī)雜志20001

6、0(10):638640.[3]胡海燕.清心開竅方對老年癡呆模型大鼠學習記憶能力的影響研究[J].浙江中西醫(yī)志2008243(2):104106.[4]楊文明.智腦膠囊對血管性癡呆模型大鼠學習記憶及腦組織鈣含量的影響[J].中國實用方劑學雜志2007(12):3436.[5]謝寧.地黃引子對AD模型大鼠定位航行學習記憶的影響[J].中醫(yī)藥學報200533(4):2829.[6]裴媛.獨活及其醇提物對自然衰老小鼠腦細胞凋亡作用的實驗研究[

7、J].遼寧中醫(yī)雜志20045(8):989990.咳喘康對博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達的影響徐艷玲曲妮妮馬麗佳趙克明鄧莉張楊王麗娜夏欣田陳鋒鄭洪亮(遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院遼寧沈陽110032)摘要:目的:研究咳喘康對博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達的影響。方法:將60只健康SD大鼠隨機分為正常組、模型組、中藥咳喘康組和激素組。除正常組外其余3組大鼠經氣管注入博萊霉素A5

8、復制肺纖維化大鼠模型各組于造模后第1天分組予以給藥于給藥7、14、28天分批處死各組大鼠每次每組5只。利用ELISA法檢測肺組織中TGFB1的含量、RTPCR法檢測肺組織中TGFB1mRNA的表達水平。結果:模型組在不同時段TGFB1含量及TGFB1mRNA表達較正常對照組均明顯增高具有顯著的統(tǒng)計學意義(P0101)。咳喘康組大鼠肺組織勻漿中TGFB1含量、TGFB1mRNA的表達水平與模型組對照降低且有隨給藥天數(shù)增加而降低的趨勢具有統(tǒng)

9、計學意義(P0101)。結論:中藥復方咳喘康具有顯著抑制博萊霉素A5致大鼠肺纖維化的作用通過降低TGFB1的含量及抑制TGFB1mRNA的表達是其可能的機制之一。關鍵詞:肺纖維化大鼠TGFB1TGFB1mRNA咳喘康中圖分類號:R28515文獻標識碼:B文章編號:10001719(2009)01014503肺間質纖維化是呼吸系統(tǒng)疾病中一組病因各異、表現(xiàn)相似的疾病譜其病理改變以大量的成纖維細胞聚集、細胞外基質沉積并伴有炎癥和損傷所致組織結

10、構破壞為特征[1]。中醫(yī)對本病的病證歸屬于肺痿、肺痹范疇。肺腎氣陰兩虛血脈瘀阻貫穿疾病的始終是公認的病機[2]。本實驗采用ELISA法及RTPCR法研究咳喘康對博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達的影響從而為肺纖維化的中醫(yī)治療提供理論依據(jù)。1材料與方法111動物成年雄性SD大鼠60只體重200~250g由中國醫(yī)科大學動物實驗中心提供合格證號:SCXK(遼)20030013。#145#遼寧中醫(yī)雜志2009年第3

11、6卷第1期表1肺組織TGFB1含量(pgmL?xs)組別n7天14天28天正常組5155.93515.469162.43114.649164.85510.660模型組5222.40424.240244.54036.925273.85819.978中藥組5215.25228.607204.78020.907v170.98212.477vv激素組5185.60817.839v172.41412.632vv172.64616.332vv注:與

12、正常組比較:P0105P0101與模型組比較:vP0105vvP0101。圖1肺組織TGFB1含量(pgmL)212肺組織中TGFB1mRNA表達模型組大鼠肺組織TGFB1mRNA表達在三個時間點上均顯著高于正常組有顯著性統(tǒng)計學意義(P0101)。第7d時咳喘康組有降低但與模型組比較無統(tǒng)計學意義而激素組降低與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P0105)。第14d咳喘康組降低與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P0105)而激素組顯著降低與模型組比較有顯著

13、性統(tǒng)計學意義(P0101)。第28d咳喘康組和激素組均顯著降低與模型組比較有顯著性統(tǒng)計學意義(P0101)而且兩組間比較無統(tǒng)計學意義。(見表2)。表2TGFB1mRNA表達(?xs)組別n7天14天28天正常組50.92620.01070.92760.38660.92260.0282模型組50.97820.01901.01850.22211.00560.0299中藥組50.97370.01080.96980.0137v0.92810.0

14、129vv激素組50.95720.0256v0.93580.0128vv0.93230.0146vv注:與正常組比較:P0105P0101與模型組比較:vP0105vvP0101。1、DNAMARKER(自上而下依次為2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp)2、正常組3、模型組4、中藥咳喘康組5、激素組圖2TGFB1mRNA在肺組織中的表達電泳圖3討論肺間質纖維化的發(fā)病機制目前尚未完全闡明傳統(tǒng)觀點認為

15、各種原因引起不同程度的肺泡炎癥在炎癥損傷和修復過程中導致肺纖維化的形成治療方法強調抗炎治療但臨床療效不理想[4]。中醫(yī)學中無肺纖維化的病名依據(jù)臨床表現(xiàn)該病可歸屬于肺痿0、肺痹0等范疇。中藥辨證治療本病在臨床上已顯示良好優(yōu)勢。中藥復方咳喘康是依據(jù)本病病機而確立的具有益氣養(yǎng)陰活血通絡作用的復方制劑用藥精練、組方嚴謹由黨參15g麥冬15g茯苓15g川芎15g赤芍15g五味子15g生地20g等16味中藥組成。方中:黨參、茯苓補中益氣、健脾益肺五

16、味子酸甘補益肺腎斂氣生津麥冬、生地養(yǎng)陰潤肺川芎、赤芍活血散瘀全方共奏益氣養(yǎng)陰、活血通絡之功。TGFB是迄今為止發(fā)現(xiàn)的細胞外基質沉積最強的促進劑不僅能刺激成纖維細胞增殖及分泌膠原還能抑制膠原的降解在肺纖維化發(fā)展中起關鍵作用[5]。因此通過降低TGFB1、抑制TGFB1mRNA的表達來實現(xiàn)對肺間質纖維化的治療成為了醫(yī)學界關注的熱點。模型組第7、14、28d時大鼠肺組織TGFB1的含量明顯高于正常組、有逐漸上升的趨勢大鼠肺組織TGFB1mRN

17、A的表達水平亦明顯高于正常組均具有統(tǒng)計學意義(P0101)說明TGFB1參與了肺纖維化的整個過程。中藥組大鼠肺組織TGFB1的含量及TGFB1mRNA的表達有著下降趨勢在造模后7d與模型組比較有所降低但無統(tǒng)計學意義14d與模型組比較有顯著差異具有統(tǒng)計學意義P010528d與模型組比較差異更加明顯具有顯著的統(tǒng)計學意義P0101。提示中藥咳喘康可能通過降低肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1的含量、及抑制TGFB1mRNA的表達從而抑制了TGFB

18、1對細胞外基質沉積的促進作用。激素組大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達亦有著下降趨勢但造模后14d起TGFB1的含量的下降趨勢不顯。激素組造模后7d大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達低于同期中藥組可能原因是中藥咳喘康在早期抗炎作用較激素氫化可的松弱而造模后28d中藥組的大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達要低于同期激素組說明中藥咳喘康在后期可通過降低TGFB1含量、抑制TGFB1mRNA表達

19、從而實現(xiàn)抑制細胞外基質沉積的作用但尚需一段起效時間。綜上所述本實驗結果表明中藥咳喘康可有效的抑制肺纖維化而通過降低TGFB1含量、抑制TGFB1mRNA的高表達起到拮抗肺纖維化的作用可能是其機制之一本實驗結果亦提示在肺纖維化的臨床治療中通過從中醫(yī)的病因病機出發(fā)對證辨證治療仍可達到降低TGFB1的含量、抑制TGFB1mRNA的表達從而阻止肺泡炎及影響肺纖維化進程而其具體全面的作用機制尚有待于進一步研究探討。參考文獻[1]李才張一寧牛俊奇等

20、.器官纖維化基礎與臨床[M].北京:人民衛(wèi)生出版社2003188.[2]張燕萍等.呼吸病中西醫(yī)結合研究現(xiàn)狀評述[J].中醫(yī)雜志200243(3):168170.[3]褚宏偉.博萊霉素A5誘發(fā)大鼠肺間質纖維化的實驗病理研究[J].臨床與實驗病理學雜志19928(3):221.[4]AmericanThacicSociety(ATS).IdiopathicPulmonaryFibrosis:DiagnosisTreatment[J].AmJ